ASSEMBLY AND ACTIVATION OF ENZYME-SSDNA COMPLEXES
酶-SSDNA 复合物的组装和激活
基本信息
- 批准号:2691547
- 负责人:
- 金额:$ 23.08万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:1993
- 资助国家:美国
- 起止时间:1993-08-01 至 2002-07-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:DNA binding protein DNA replication bacteriophage T4 circular dichroism crosslink enzyme complex enzyme induction /repression fluorescence spectrometry genetic recombination helicase high performance liquid chromatography intermolecular interaction protein biosynthesis protein structure function recombinase sedimentation stoichiometry ultraviolet radiation virus protein
项目摘要
DESCRIPTION (adapted from investigator's abstract): The objective of Dr.
Morrical's research is to characterize the protein-ssDNA and protein-protein
interactions required for the assembly and activation of enzyme complexes on
single-stranded DNA. Two different representative enzyme-ssDNA assembly
problems in the bacteriophage T4 DNA recombination and replication systems
will be examined: (1) Assembly of presynaptic filaments containing the T4
uvsX recombinase bound to ssDNA; and (2) Assembly of gp41, the essential DNA
helicase component of the phage primosome, onto ssDNA. A common feature is
that both enzymes must assemble onto ssDNA in the cell that is already
covered with tightly bound gp32, the T4 ssDNA-binding protein. Another
common feature is that both enzymes require a second "assembly factor" (uvsY
or gp59, respectively) for assembly onto gp32-ssDNA complexes. This project
focuses on the detailed biochemical mechanisms used by uvsY to load uvsX,
and by gp59 to load gp41, onto gp32-covered ssDNA molecules. The SPECIFIC
AIMS are the following: AIM 1 Characterize structural and biochemical
aspects of uvsY protein and uvsY-ssDNA complexes. The following specific
hypotheses will be tested: that ssDNA binds to a hexameric form of uvsY and
causes a significant structural rearrangement of the uvsY hexamer; and that
uvsY binding causes extensive unstacking of ssDNA bases consistent with
wrapping or other structural distortions of the ssDNA. AIM 2 Characterize
interactions of uvsY protein with gp32-2ssDNA and uvsX-ssDNA complexes. The
following specific hypotheses will be tested: that uvsY retains its
hexameric form in complexes with gp32 and uvsX proteins; and that uvsY
binding destabilizes gp32-ssDNA interactions while stabilizing uvsX-ssDNA
interactions. AIM 3 Characterize interactions of gp59 protein with
gp32-ssDNA complexes. The following specific hypotheses will be tested:
that a critical cluster of gp59 molecules bound to gp32-ssDNA forms the
minimal assembly site for the gp41 helicase; and that gp59 destabilizes
gp32-ssDNA complexes through protein-protein interactions with ssDNA-bound
gp32 molecules. AIM # 4 Characterize interactions of gp59 protein with the
gp41 DNA helicase. The specific hypothesis that gp59 promotes the
hexamerization of gp41 will be tested.
描述(改编自研究者摘要):Dr.
Morrical的研究是表征蛋白质-ssDNA和蛋白质-蛋白质
组装和激活酶复合物所需的相互作用
单链DNA 两种不同的代表性酶-ssDNA组装
噬菌体T4 DNA重组和复制系统中的问题
将检查:(1)含有T4的突触前细丝的组装
uvsX重组酶与ssDNA的结合;(2)gp 41的组装,
噬菌体启动体的解旋酶组分,到ssDNA上。 一个共同的特点是
这两种酶必须组装到细胞中的ssDNA上,
覆盖有紧密结合的gp 32,T4 ssDNA结合蛋白。 另一
两种酶的共同特征是都需要第二个“组装因子”(uvsY
或gp 59)组装到gp 32-ssDNA复合物上。 这个项目
侧重于详细的生化机制所使用的uvsY加载uvsX,
并通过gp 59将gp 41加载到gp 32覆盖的ssDNA分子上。 具体
目的如下:目的1表征结构和生物化学
uvsY蛋白和uvsY-ssDNA复合物的方面。 以下具体
假设将被测试:ssDNA结合六聚体形式的uvsY,
引起uvsY六聚体的显著结构重排;并且
uvsY结合导致ssDNA碱基的大量解堆积,
ssDNA的缠绕或其他结构扭曲。 AIM 2表征
uvsY蛋白与gp 32 -2ssDNA和uvsX-ssDNA复合物的相互作用。 的
将测试以下特定假设:uvsY保留其
与gp 32和uvsX蛋白复合六聚体形式;和uvsY
结合使gp 32-ssDNA相互作用不稳定,同时使uvsX-ssDNA稳定
交互. 目的3研究gp 59蛋白与
gp 32-ssDNA复合物。 将检验以下特定假设:
与gp 32-ssDNA结合的gp 59分子的关键簇形成了
gp 41解旋酶的最小装配位点; gp 59使
通过与ssDNA结合的蛋白质-蛋白质相互作用的gp 32-ssDNA复合物
gp 32分子。 目的#4表征gp 59蛋白与
gp 41 DNA解旋酶。 关于gp 59促进
将测试GP 41的六聚化。
项目成果
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专著数量(0)
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