ANALYSES OF DYNEIN HEAVY CHAIN MUTATION IN TETRAHYMENA

四膜虫动力蛋白重链突变分析

基本信息

  • 批准号:
    2888680
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 10.32万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    美国
  • 项目类别:
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    美国
  • 起止时间:
    1999-08-01 至 2002-07-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

DESCRIPTION (adapted from abstract): Cilia and flagella are complex microtubular organelles that are ubiquitous among eukaryotes, including humans, where they are found in the respiratory tract, the female reproductive tract and on sperm cells. Ciliary and flagellar dysfunction resulting from the absence of dynein arms has been reported to cause respiratory and fertility problems in humans and other mammals. The long term objectives of this work are to understand the ways dyneins are organized in ciliary axonemes and to understand the role(s) of each different dynein in ciliary motility. This will be done by using targeted gene knockout techniques to introduce mutations into genes encoding dynein heavy chains in the unicellular protozoan, Tetrahymena thermophila. To initiate those studies a mutation was generated in the Tetrahymena DYH6 gene. Initial characterization of this mutant (DYH6 KO) indicates that axonemes isolated form the mutant are missing the two dynein heavy chains that make up 18S dynein. The specific aims of this project are 1) to test the hypothesis that Dyh6p is a component of Tetrahymena inner arm dynein I by determining where 18S dynein is located in the axoneme and by completing the characterization of 18S dynein; 2) to determine the role 18S dynein plays in ciliary motility by determining the frequency of sliding disintegration of isolated axonernes in the absence or presence of trypsin, by determining the rate at which microtubule doublets slide apart during disintegration, and by determining the wave form in mutant and wild-type cilia; 3) by determining the effect of the DYH6 KO mutation on ciliary motility by determining swimming velocity and behavior in mutant and wild-type cells. The results of this work should add to the understanding of dynein organization and function in cilia and flagella.
描述(改编自摘要):纤毛和鞭毛是复杂的 微管细胞器在真核生物中普遍存在,包括人类, 在呼吸道、女性生殖道 和精子细胞。纤毛和鞭毛功能障碍导致的 据报道,动力蛋白臂的缺失会导致呼吸和生育 人类和其他哺乳动物的问题。这项工作的长期目标是 为了了解动力蛋白在纤毛轴丝中的组织方式, 了解每种不同的动力蛋白在纤毛运动中的作用。这将 通过使用靶向基因敲除技术将突变引入 单细胞原生动物四膜虫中编码动力蛋白重链的基因 嗜热菌为了启动这些研究,在细胞中产生了一种突变, 四膜虫DYH 6基因。该突变体(DYH 6 KO)的初步表征 表明从突变体中分离的轴丝缺失了两个动力蛋白 组成18 S动力蛋白的重链。该项目的具体目标是:(1) 为了检验Dyh 6p是四膜虫内臂的组分的假设, 通过确定18 S动力蛋白在轴丝中的位置, 完成18 S动力蛋白的表征; 2)确定18 S 动力蛋白通过决定滑动频率在纤毛运动中起作用 在胰蛋白酶存在或不存在的情况下,通过 确定微管双峰在过程中滑动分开的速率 解体,并通过确定突变体和野生型纤毛的波形; 3)通过测定DYH 6 KO突变对纤毛运动的影响, 确定突变体和野生型细胞的游泳速度和行为。的 这项工作的结果应该增加对动力蛋白组织的理解, 在纤毛和鞭毛中起作用。

项目成果

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专著数量(0)
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会议论文数量(0)
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    $ 10.32万
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