ELECTRIC BIREFRINGENCE OF DNA RESTRICTION FRAGMENTS
DNA 限制性片段的电双折射
基本信息
- 批准号:3277319
- 负责人:
- 金额:$ 13.23万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:1981
- 资助国家:美国
- 起止时间:1981-07-01 至 1992-06-30
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
The interaction of DNA restriction fragments with electric fields
will be investigated using the technique of transient electric
birefringence. Particular emphasis will be placed on a study of
the orientation and disorientation of DNA restriction fragments
imbedded in agarose and in polyacrylamide gels. Electric
birefringence is a particularly useful technique for these studies,
because it measures directly the orientation of the DNA
molecules in the gel matrix. Orientation will be studied with
pulsed electric fields of different amplitudes and durations, with a
variable delay between pulses, and with rapidly reversing electric
fields. Orientation in a solution containing linear polyacrylamide
molecules of different charge densities will also be studied.
Electric birefringence studies will be continued on the
orientation, disorientation, reversing field, and saturation
behavior of two 147 base pair restriction fragments obtained from
the plasmid pBR322. These two fragments differ in their mobility
on polyacrylamide gels, and in other physical properties, and
typify sequence-related structural differences in the Watson-
Crick helix. Other pairs of normally and abnormally slowly
migrating DNA fragments will be studied, as well as synthetic
polynucleotides.
Additional electric birefringence studies will focus on the
saturation and reversing field behavior of DNA fragments of
different molecular weights in free solution, the B A
conformational transition of DNA restriction fragments, the
binding of restriction enzymes to DNA fragments, the binding of
ethidium bromide and other ligands to DNA fragments, the
binding of ethidium bromide and other ligands to DNA fragments,
and the electric birefringence of linear polyacrylamides of
different molecular weights and charge densities. Many of the
electric birefringence measurements will be correlated with
circular dichroism and/or gel electrophoretic studies. The result
of these experiments will clarify the mechanism of gel
electrophoresis in different gel media and identify some of the
effects of sequence-dependent conformation differences on the
physical properties of DNA. The long range goals of this research
are to understand the behavior of DNA molecule in solution and to
characterize the mechanism of interaction of DNA and other
polyions with electric fields.
DNA 限制性片段与电场的相互作用
将使用瞬态电技术进行研究
双折射。 将特别强调研究
DNA 限制性片段的方向和迷失方向
包埋在琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中。 电的
双折射对于这些研究来说是一种特别有用的技术,
因为它直接测量 DNA 的方向
凝胶基质中的分子。 将研究方向
不同幅度和持续时间的脉冲电场,
脉冲之间的可变延迟,并具有快速反转电动
字段。 含有线性聚丙烯酰胺的溶液中的取向
不同电荷密度的分子也将被研究。
电双折射研究将继续进行
定向、迷失方向、反向场和饱和度
两个 147 碱基对限制性片段的行为
质粒pBR322。 这两个片段的移动性不同
聚丙烯酰胺凝胶和其他物理特性,以及
典型地表示 Watson 中与序列相关的结构差异
克里克螺旋。 其他对正常和异常缓慢
将研究迁移的 DNA 片段以及合成的 DNA 片段
多核苷酸。
其他电双折射研究将集中于
DNA 片段的饱和度和反转场行为
游离溶液中不同分子量的 B A
DNA 限制性片段的构象转变,
限制性内切酶与 DNA 片段的结合
溴化乙锭和 DNA 片段的其他配体,
溴化乙锭和其他配体与 DNA 片段的结合,
以及线性聚丙烯酰胺的电双折射
不同的分子量和电荷密度。 许多
电双折射测量将与
圆二色性和/或凝胶电泳研究。 结果
这些实验将阐明凝胶的机理
在不同的凝胶介质中进行电泳并鉴定一些
序列依赖性构象差异对
DNA 的物理性质。 本研究的长期目标
目的是了解 DNA 分子在溶液中的行为并
描述DNA与其他物质相互作用的机制
具有电场的聚离子。
项目成果
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