TRANSCRIPTIONAL ACTIVATION OF THE APOLIPOPROTEIN B GENE

载脂蛋白 B 基因的转录激活

基本信息

  • 批准号:
    3472923
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 11.43万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    美国
  • 项目类别:
  • 财政年份:
    1990
  • 资助国家:
    美国
  • 起止时间:
    1990-01-01 至 1994-12-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Apolipoprotein B is the sole protein component of LDL and mediates the catabolism of LDL via the LDL receptor. Their is strong evidence that alterations in the structure of regulation of synthesis of this protein play a major role in the pathogenesis of atherosclerosis. Thus, high or low levels of apoB or LDL are associated with increases or decreased risk, respectively, of coronary artery disease. The goals of the application are to study the mechanism of transcriptional regulation of the apoB gene. The specific aims are: 1) to identify the recognition sequences of nuclear factors involved in the transcriptional activation of the human apoB gene. These recognition sequences will be identified by: a) site-directed mutagenesis; b) competition footprinting analysis; c) fractionation of nuclear extracts on a heparin sepharose column and analysis of the various fractions by DNAse I footprinting and gel retardation assays. 2) to identify the different positive or negative transcriptional factors which regulate the hepatic expression of human apoB gene. The factors will be identified by: a) gel retardation competition experiments; b) biochemical purification by DNA affinity chromatography. The purified factor will be used to obtain limited protein sequence information; b) isolation and characterization of cDNA and genomic clones. Cloning will involve initial screening of a liver cDNA library with synthetic oligonucleotides corresponding to the amino acid sequence or screening an expression library with the oligonucleotide recognition sequence. The genomic sequence will be determined by screening a genomic library with the cDNA probe; c) identification of the properties of this factor from the cRNAs produced in vitro. To fully understand the apoB gene regulation will eventually require the purification of all transcriptional factors involved and the identification of the means which they interact or their activity is modulated by events of cell differentiation. Understanding the regulation of expression of apoB may provide in the near future new approaches toward controlling our plasma LDL and apoB levels.
载脂蛋白 B 是 LDL 的唯一蛋白质成分,介导 LDL 通过 LDL 受体分解代谢。 他们的有力证据表明 该蛋白质合成调节结构的改变 在动脉粥样硬化的发病机制中起重要作用。 因此,高或 apoB 或 LDL 水平低与风险增加或降低相关, 分别是冠状动脉疾病。 该应用程序的目标是 研究apoB基因的转录调控机制。 这 具体目标是: 1) 鉴定核的识别序列 参与人类 apoB 基因转录激活的因素。 这些识别序列将通过以下方式识别: a) 定点 诱变; b) 竞争足迹分析; c) 分馏 肝素琼脂糖柱上的核提取物和各种分析 通过 DNAse I 足迹和凝胶阻滞测定进行级分。 2)到 识别不同的正转录因子或负转录因子 调节人apoB基因的肝脏表达。 因素将是 通过以下方法鉴定: a) 凝胶阻滞竞争实验; b) 生化 通过DNA亲和层析纯化。 纯化后的因子为 用于获取有限的蛋白质序列信息; b) 隔离和 cDNA 和基因组克隆的表征。 克隆将涉及初始 用合成寡核苷酸筛选肝脏 cDNA 文库 对应氨基酸序列或筛选表达文库 具有寡核苷酸识别序列。 基因组序列将 通过用cDNA探针筛选基因组文库来确定; c) 从产生的 cRNA 中鉴定该因子的特性 体外。 充分了解apoB基因调控最终将 需要纯化所有涉及的转录因子和 识别他们互动的方式或他们的活动 受细胞分化事件的调节。 了解法规 apoB 表达的研究可能在不久的将来提供新的方法 控制我们的血浆 LDL 和 apoB 水平。

项目成果

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