PROCESSING OF DENGUE VIRUS POLYPROTEIN NS3-NS4A-NS4B-NS5 DOMAIN

登革热病毒多蛋白NS3-NS4A-NS4B-NS5结构域的加工

• 批准号: 3803255
• 负责人: A CAHOUR
• 金额: --
• 依托单位: NATIONAL INSTITUTE OF ALLERGY AND INFECTIOUS DISEASES
• 依托单位国家: 美国
• 资助国家: 美国
• 起止时间: 至
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://reporter.nih.gov/project-details/3803255
• 关键词: Flaviviridae; chimeric proteins; dengue virus; fusion gene; gene expression; genetic manipulation; protein sequence; protein signal sequence; protein structure function; vaccinia virus; virus genetics; virus protein

The cleavage mechanism utilized for expression of the polyprotein NS3- NS4A-NS4B-NS5 domain of dengue virus was studied with the aim of elucidating the functional activities of these dengue virus proteins. For this purpose, recombinant vaccinia viruses v(NS2B-NS3-NS4A-NS4B- NS5), v(NS3-NS4A-NS4B-NS5), v(NS4A-NS4B-NS5), and v(NS4B-NS5) were constructed. These recombinants were used to infect cells and the labelled lysates were analyzed by NS3 or NS5 specific antiserum. Our findings indicated that NS2B is required for processing of the downstream nonstructural proteins. In the presence of NS2B supplied in trans, polyprotein NS3-NS4A-NS4B-NS5 was cleaved at the NS3-NS4A junction although less efficiently than at the NS4B-NS5 junction. The flavivirus NS4A-NS4B cleavage junction follows a long hydrophobic sequence. The polyprotein NS4A-NS4B-NS5 segment was properly cleaved at the NS4A-NS4B junction in the absence of other dengue viral functions such as the NS1-NS2A and NS2B-NS3 protease systems. However, v(NS3-NS4A-NS4B-NS5) expressed only the uncleaved polyprotein precursor. Thus, cleavage at the NS3-NS4A junction appears to be a prerequisite for cleavage at the downstream junction to take place. Finally, recombinants that expressed an uncleaved NS4B-NS5 polyprotein, such as NS3-NS4A-NS4B-NS5, NS4A-NS4B-NS5 or NS4B-NS5, produced properly cleaved NS5 when used for coinfection with v(NS2B-NS3 30%), or with v(NS2B) plus v(NS3). These results indicated that cleavage at the NS4B-NS5 junction of the polyprotein is mediated by NS2B and NS3 in trans.

用于表达多蛋白 NS3- 的切割机制 研究登革热病毒的 NS4A-NS4B-NS5 结构域，目的是 阐明这些登革热病毒蛋白的功能活性。 为此，重组痘苗病毒 v(NS2B-NS3-NS4A-NS4B- NS5)、v(NS3-NS4A-NS4B-NS5)、v(NS4A-NS4B-NS5) 和 v(NS4B-NS5) 建造的。 这些重组体被用来感染细胞和 通过 NS3 或 NS5 特异性抗血清分析标记的裂解物。 我们的 研究结果表明 NS2B 是处理 下游非结构蛋白。 在存在 NS2B 的情况下 反式，多蛋白 NS3-NS4A-NS4B-NS5 在 NS3-NS4A 处被切割 尽管效率低于 NS4B-NS5 交界处。 这 黄病毒 NS4A-NS4B 裂解连接遵循长疏水性 顺序。 多蛋白 NS4A-NS4B-NS5 片段在 NS4A-NS4B 连接处缺乏其他登革热病毒功能 例如 NS1-NS2A 和 NS2B-NS3 蛋白酶系统。 然而， v(NS3-NS4A-NS4B-NS5)仅表达未切割的多蛋白前体。 因此，NS3-NS4A 连接处的裂解似乎是 在下游连接处发生裂解。 最后， 表达未切割的 NS4B-NS5 多蛋白的重组体，例如 NS3-NS4A-NS4B-NS5、NS4A-NS4B-NS5 或 NS4B-NS5，已正确切割生产 NS5 用于与 v(NS2B-NS3 30%) 或 v(NS2B) plus 共感染 v(NS3)。 这些结果表明 NS4B-NS5 连接处的裂解 多蛋白的作用由反式 NS2B 和 NS3 介导。