MOLECULAR MECHANISMS OF MONOCYTE CHEMOTAXIS

单核细胞趋化性的分子机制

基本信息

  • 批准号:
    2685447
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 21.84万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    美国
  • 项目类别:
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    美国
  • 起止时间:
    1995-04-01 至 2000-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Mononuclear phagocytes are recruited to sites of pulmonary inflammation. These sites can be associated with infectious, fibrosing and granulomatous lung diseases. Recruitment is accomplished by directed migration (chemotaxis). CD87 (the urokinase plasminogen activator (uPA) receptor) is required for mononuclear phagocyte chemotaxis. The central hypothesis of this proposal is that the essential role CD87 plays in mononuclear phagocyte chemotaxis is dependent upon its expression, its localization to specific plasma membrane micro-domains called caveolae, and its sequential interaction with signaling proteins and other cell surface receptors. The overall objective of this proposal is to delineate the mechanism by which CD87 mediates mononuclear phagocytes chemotaxis. Our specific objectives are: l) Determine a) whether aggregation of CD87 within caveolae is required, and b) determine whether caveolin, the protein lining caveolae, participates in signal transduction in during chemotaxis. 2) Determine whether CD87 associates with complement receptor 3 (CR3) via carbohydrate- lectin interactions to effect chemotaxis. 3) Determine if a glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase D (GPI-PLD) mediated mechanism contributes importantly to CD87 shedding. 4) Using transgenic uPA deficient mice, determine if binding of uPA participates importantly in CD87 function during chemotaxis in vitro, and cellular recruitment in response to pulmonary inflammation induced by C. neoformans infection in vivo. l) Visual localization of CD87 to caveolae and colocalization of CD87 and caveolin will be accomplished by immunolabeling and electron microscopy and immunofluorescent quantitative confocal microscopy. Physical binding of CD87 and caveolin will be assessed by immunoprecipitation and Western blotting. Signal transduction via caveolin will be assessed by immunoprecipitation and Western blotting with anti- phosphorotyrosine antibodies. 2) Carbohydrate-lectin interactions between CD87 and CR3 will be assessed by colocalization studies in the presence and absence of specific saccharides. Studies evaluating chemotaxis will be done in parallel. Direct interaction between CR3 and CD87 and the specific relevant domains of CD87 will be assessed using murine cells transfected with CR3 and soluble human recombinant CD87. 3) PMA-and cytokine-induced CD87 shedding will quantitated by ELISA and the mechanism determined by analysis of the molecular weight of shed CD87 compared with known CD87 variants. Specific inhibitors of candidate mechanisms will be used to assess the relative contribution of each to agonist-specific CD87 shedding. 4) Using uPA deficient mice, we will determine whether uPA plays a role in mononuclear phagocytes chemotaxis in vitro, or in leukocyte recruitment in response to pulmonary C. neoformans infection in vivo. These studies will elucidate the molecular mechanism of CD87 dependent mononuclear phagocyte chemotaxis. Through this knowledge, specific therapeutic interventions may be developed to control and modulate inflammatory responses.
单核吞噬细胞被募集到肺部炎症部位。 这些部位可能与感染性、纤维化和肉芽肿有关 肺部疾病。招募是通过定向迁移完成的 (趋化性)。 CD87(尿激酶纤溶酶原激活剂 (uPA) 受体)是 单核吞噬细胞趋化作用所需。中心假设为 这个建议是CD87在单核细胞中发挥的重要作用 吞噬细胞的趋化性取决于其表达、定位 称为小窝的特定质膜微域及其顺序 与信号蛋白和其他细胞表面受体的相互作用。这 该提案的总体目标是界定一个机制,通过该机制 CD87 介导单核吞噬细胞趋化性。我们的具体目标 是: l) 确定 a) CD87 在小凹内的聚集是否是 b) 确定小窝蛋白(衬里小窝的蛋白质)是否 参与趋化过程中的信号转导。 2)确定 CD87 是否通过碳水化合物与补体受体 3 (CR3) 结合 凝集素相互作用以影响趋化性。 3) 确定是否 糖基磷脂酰肌醇特异性磷脂酶 D (GPI-PLD) 介导 机制对 CD87 脱落有重要贡献。 4)使用转基因 uPA 缺陷小鼠,确定 uPA 的结合是否重要参与 体外趋化过程中 CD87 的功能以及细胞募集 对新型隐球菌感染引起的肺部炎症的反应 体内。 l) CD87 视觉定位到小窝和共定位 CD87和caveolin将通过免疫标记和电子来完成 显微镜和免疫荧光定量共聚焦显微镜。 CD87 和 Caveolin 的物理结合将通过以下方式进行评估 免疫沉淀和蛋白质印迹。通过小窝蛋白进行信号转导 将通过免疫沉淀和蛋白质印迹法进行评估 磷酸酪氨酸抗体。 2)碳水化合物-凝集素之间的相互作用 CD87 和 CR3 将通过共定位研究进行评估 且不存在特定糖类。评估趋化性的研究将是 并行完成。 CR3 和 CD87 之间的直接相互作用以及特定的 CD87 的相关域将使用转染的小鼠细胞进行评估 具有 CR3 和可溶性人重组 CD87。 3) PMA-和细胞因子诱导 CD87 脱落将通过 ELISA 进行定量,并通过以下方法确定机制 脱落CD87与已知CD87相比的分子量分析 变体。候选机制的特定抑制剂将用于 评估各自对激动剂特异性 CD87 的相对贡献 脱落。 4) 使用uPA缺陷小鼠,我们将确定uPA是否发挥作用 在体外单核吞噬细胞趋化性或白细胞趋化性中发挥作用 体内响应肺部新型隐球菌感染而进行的募集。 这些研究将阐明CD87依赖的分子机制 单核吞噬细胞的趋化作用。 通过这些知识,具体 可以开发治疗干预措施来控制和调节 炎症反应。

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)

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