EPR: ADENOSYLCOBALAMIN DEPENDENT ENZYME RIBONUCLEOTIDE TRIPHOSPHATE REDUCTASE
EPR:腺苷钴胺依赖性酶核糖核苷酸三磷酸还原酶
基本信息
- 批准号:6281740
- 负责人:
- 金额:$ 0.19万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:1998
- 资助国家:美国
- 起止时间:1998-05-05 至 2000-04-30
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
Ribonucleotide triphosphate reductase (RTPR) from L. leichmannii
catalyzes the adenosylcobalamin-dependent reduction of nucleotides to
deoxynucleotides. When the enzyme is rapidly mixed with
adenosylcobalamin, an allosteric effector and a reducing system, a
paramagnetic species is generated in a kinetically competent fashion.
Although originally observed over 20 years ago, the identity of the
radical species was previously unknown. Isotopic labeling of cystein
in conjunction with simulations of this system have recently shown
that the signal is consistent with a thiyl radical interacting with
cob(II)alamin. However, much remains to be learned concerning the
structure of this thiyl radical-cob(II)alamin pair. High frequency
EPR and ENDOR spectroscopies will be used to give insight into the
molecular and electronic structure of the radical pair. Refinement of
the distance between unpaired electrons and the relative orientation
of the thiyl radical and cob(II)alamin pair will give additional
structural additional structural detail to the enzyme active site. A
key question concerns the ate of the deoxyadenosyl moiety, since the
5'deosyadenosyl radical proposed to initially form upon Co-C bond
homolysis has not been observed. Pulsed EPR/ENDOR in conjunction with
13C and 2H labeling at various positions on the 5'deoxyadenosine will
determine its placement in the active site. In addition, RTPR is
readily inhibited upon incubation with several different nucleotide
analogs via unknown radical based mechanisms. Pulsed EPR, ENDOR and
high frequency EPR spectroscopy will be performed in order to identify
these radical intermediates and to determine the mechanisms of RTPR
inhibition.
来自莱希曼乳杆菌的核糖核苷酸三磷酸还原酶 (RTPR)
催化腺苷钴胺素依赖性核苷酸还原
脱氧核苷酸。 当酶与酶快速混合时
腺苷钴胺素,一种变构效应物和还原系统,
顺磁性物质以动力学上有效的方式产生。
尽管最初观察到是在 20 多年前,但
自由基物种以前是未知的。 半胱氨酸的同位素标记
结合该系统的模拟最近表明
该信号与硫基自由基相互作用一致
玉米穗(II)阿拉明。 然而,关于
该硫基自由基-cob(II)丙胺对的结构。 高频
EPR 和 ENDOR 光谱将用于深入了解
自由基对的分子和电子结构。 细化
不成对电子之间的距离和相对方向
硫基自由基和 cob(II)alamin 对将给出额外的
结构 酶活性位点的附加结构细节。 一个
关键问题涉及脱氧腺苷部分的作用,因为
5'脱糖腺苷基团最初在 Co-C 键上形成
尚未观察到均分解。 脉冲 EPR/ENDOR 结合
5' 脱氧腺苷上不同位置的 13C 和 2H 标记将
确定其在活动站点中的位置。 此外,RTPR 是
与几种不同的核苷酸一起孵育后很容易被抑制
通过未知的基于自由基的机制进行类似物。 脉冲 EPR、ENDOR 和
将进行高频 EPR 光谱分析以识别
这些自由基中间体并确定 RTPR 的机制
抑制。
项目成果
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