FLUORESCENCE CORRELATION SPECTROSCOPY IN CELLS W/ TWO PHOTON EXCITATION
具有两个光子激发的细胞荧光相关光谱
基本信息
- 批准号:6349390
- 负责人:
- 金额:$ 0.31万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:2000
- 资助国家:美国
- 起止时间:2000-09-01 至 2001-08-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
In view of the utilization of human genome data the capability of
sequencing the genetic information of single cells without prior
amplification would potentiate speed and sensitivity of gene function
recognition. We propose to carry out single molecule sequencing by
following the stepwise addition of base pairs during production of the
complementary DNA strand of a given (unknown) template strand by the
enzyme DNA polymerase. The incorporation of each base at the
polymerase active site is to be recognized by detection of a specific
fluorescent marker. Preliminary studies on DNA synthesis on
immobilized template strands utilized the fluorescent dye PicoGreen
(Molecular Probes Inc.), and it is shown that individual molecules of
newly synthesized DNA can be detected. Next, we attempt to detect the
separate binding events of PicoGreen molecules to the newly generated
DNA with a fluorescence correlation spectroscopy setup. The DNA
sequencing approach will also utilize nanofabricated compon ents for
DNA manipulation and possible fluid flow.
鉴于人类基因组数据的利用,
测序单细胞的遗传信息,而无需事先
扩增将提高基因功能的速度和灵敏度
识别. 我们建议进行单分子测序,
在生产过程中逐步添加碱基对后,
在一个实施例中,通过将给定(未知)模板链的互补DNA链与给定(未知)模板链的互补DNA链连接,
DNA聚合酶。 每个基地的合并,
聚合酶活性位点是通过检测特异性
荧光标记。 细胞DNA合成的初步研究
固定化的模板链利用荧光染料PicoGreen
(分子探针公司),研究表明,
可以检测到新合成的DNA。 接下来,我们尝试检测
PicoGreen分子与新产生的
DNA与荧光相关光谱设置。 的DNA
测序方法还将利用纳米制造的组件,
DNA操作和可能的液体流动。
项目成果
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