Target discovery in platelets by in situ proteome reactivity profiling

通过原位蛋白质组反应性分析发现血小板靶标

基本信息

  • 批准号:
    7295727
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 23.2万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    美国
  • 项目类别:
  • 财政年份:
    2006
  • 资助国家:
    美国
  • 起止时间:
    2006-09-01 至 2008-07-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

DESCRIPTION (provided by applicant): Circulating platelets generate intracellular signals when exposed to extracellular matrix proteins and soluble agonists, resulting in rapid activation of adhesion receptors such as integrin alphallb-beta3, platelet aggregation, secretion of granular contents and increased procoagulant activity. These changes contribute not only to normal hemostasis but also to thrombotic events such as myocardial infarction and stroke. Platelets are anucleate and therefore not amenable to direct molecular approaches, thus limiting our understanding of the specific components of these activation-dependent signaling pathways. The Parise laboratory has become proficient in the use of knockdown and overexpression approaches in megakaryocytes, which are platelet precursors, to dissect signaling pathways relevant to platelet function. Here we propose to join forces with Dr. Benjamin Cravatt of The Scripps Research Institute, who has developed a novel natural products inspired spiroepoxide probe library that has been used previously to identify enzymes of importance in transformed cells. Probes from this library bind covalently to target enzymes in cell-based screens, thus affecting specific cellular readouts. By use of new technology termed in situ proteome profiling, covalently bound probes are then labeled with a biotin and fluorescent tag by use of "click chemistry", thus facilitating rapid identification of targets via mass spectrometry. However, this library has never been applied to platelets. Therefore, we propose to 1) identify molecular targets necessary for essential platelet functions by screening human platelets with the spiroepoxide probe library and performing in situ proteome reactivity profiling, and 2) validate molecular targets in megakaryocytes and platelets by use of independent counter screens involving overexpression and knock down, as well as pharmacological inhibition and enzyme activity assays, when possible, of candidate targets. Platelet-based screening and proteome reactivity profiling with this library, together with the ability to modulate protein expression levels in megakaryocytes provides a powerful combination of approaches in the platelet field for rapidly identifying and verifying new therapeutic targets for modulating platelet function.
描述(由申请人提供): 当暴露于细胞外基质蛋白和可溶性激动剂时,循环血小板产生细胞内信号,导致粘附受体如整联蛋白β 1 b-β 3的快速活化、血小板聚集、颗粒状内容物的分泌和促凝血活性增加。这些变化不仅有助于正常止血,而且还有助于血栓形成事件,如心肌梗死和中风。血小板是无核的,因此不适合直接的分子方法,从而限制了我们对这些活化依赖性信号通路的特定组分的理解。Parise实验室已经精通在巨核细胞(血小板前体)中使用敲低和过表达方法来剖析与血小板功能相关的信号通路。在这里,我们建议与Scripps研究所的Benjamin Cravatt博士合作,他开发了一种新的天然产物灵感螺环氧化物探针库,以前曾用于识别转化细胞中重要的酶。来自该文库的探针在基于细胞的筛选中共价结合到靶酶,从而影响特定的细胞读数。通过使用称为原位蛋白质组分析的新技术,然后通过使用“点击化学”用生物素和荧光标签标记共价结合的探针,从而便于通过质谱法快速鉴定靶标。然而,该文库从未应用于血小板。因此,我们建议1)通过用螺环氧化物探针文库筛选人血小板并进行原位蛋白质组反应性分析来鉴定必需的血小板功能所需的分子靶标,以及2)通过使用涉及过表达和敲低的独立计数器筛选以及候选靶标的药理学抑制和酶活性测定(如可能)来验证巨核细胞和血小板中的分子靶标。基于血小板的筛选和蛋白质组反应性分析与该库一起,以及调节巨核细胞中蛋白质表达水平的能力,提供了血小板领域中用于快速鉴定和验证用于调节血小板功能的新治疗靶点的方法的有力组合。

项目成果

期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)

数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ patent.updateTime }}

Leslie V. Parise其他文献

Integrin αa<sub>4</sub>β<sub>1</sub> and Glycoprotein IV (CD36) Are Expressed on Circulating Reticulocytes in Sickle Cell Anemia
  • DOI:
    10.1182/blood.v82.12.3548.3548
  • 发表时间:
    1993-12-15
  • 期刊:
  • 影响因子:
  • 作者:
    Christopher C. Joneckis;Rhonda L. Ackley;Eugene P. Orringer;Elizabeth A. Wayner;Leslie V. Parise
  • 通讯作者:
    Leslie V. Parise
Phorbol Ester Enhances Integrin αIIbβ3-Dependent Adhesion of Human Erythroleukemic Cells to Activation-Dependent Monoclonal Antibodies
  • DOI:
    10.1182/blood.v87.3.968.bloodjournal873968
  • 发表时间:
    1996-02-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
  • 作者:
    Christel Boudignon-Proudhon;Pankaj M. Patel;Leslie V. Parise
  • 通讯作者:
    Leslie V. Parise
Lack Of Inhibition Of Thromboxane Production Despite Inhibition Of Platelet Function By 1,3-Bis(2 Chloroethyl)-1-Nitrosourea (BCNU)
尽管 1,3-双(2 氯乙基)-1-亚硝基脲 (BCNU) 抑制血小板功能,但对血栓素产生缺乏抑制作用
  • DOI:
  • 发表时间:
    1981
  • 期刊:
  • 影响因子:
    6.7
  • 作者:
    Leslie V. Parise;D. Venton;G. C. Breton
  • 通讯作者:
    G. C. Breton

Leslie V. Parise的其他文献

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

{{ truncateString('Leslie V. Parise', 18)}}的其他基金

CIB1 regulation of endothelial function
CIB1对内皮功能的调节
  • 批准号:
    8265825
  • 财政年份:
    2010
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
CIB1 regulation of endothelial function
CIB1对内皮功能的调节
  • 批准号:
    8432822
  • 财政年份:
    2010
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
CIB1 regulation of endothelial function
CIB1对内皮功能的调节
  • 批准号:
    7892663
  • 财政年份:
    2010
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
CIB1 regulation of endothelial function
CIB1对内皮功能的调节
  • 批准号:
    8062126
  • 财政年份:
    2010
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
2009 Cell Biology of Megakaryocytes and Platelets Gordon Research Conference
2009年巨核细胞和血小板细胞生物学戈登研究会议
  • 批准号:
    7611180
  • 财政年份:
    2009
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
STRUCTURE/PROTEOMICS CORE
结构/蛋白质组学核心
  • 批准号:
    7474514
  • 财政年份:
    2007
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
Activation of cAMP-Mediated Sicke Cell Adhesion
cAMP 介导的病细胞粘附的激活
  • 批准号:
    7407406
  • 财政年份:
    2007
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
ACTIVATION OF THE PLATELET FIBROGEN RECEPTOR
血小板纤维原受体的激活
  • 批准号:
    7474509
  • 财政年份:
    2007
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
STRUCTURE/PROTEOMICS CORE
结构/蛋白质组学核心
  • 批准号:
    7397613
  • 财政年份:
    2006
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
RED BLOOD CELL ADHESION TO THE ENDOTHELIUM
红细胞与内皮的粘附
  • 批准号:
    7625493
  • 财政年份:
    2006
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:

相似国自然基金

Agonist-GPR119-Gs复合物的结构生物学研究
  • 批准号:
    32000851
  • 批准年份:
    2020
  • 资助金额:
    24.0 万元
  • 项目类别:
    青年科学基金项目

相似海外基金

Novel PPAR-gamma agonist selectively activate the ligand binding domain of PPAR-gamma and improve pathology and memory deficits in a 3xTg-Ad mouse model.
新型 PPAR-gamma 激动剂选择性激活 PPAR-gamma 的配体结合域,改善 3xTg-Ad 小鼠模型的病理和记忆缺陷。
  • 批准号:
    8890576
  • 财政年份:
    2015
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
Atomic force microscopy study of structural and functional changes in membrane proteins upon agonist and antagonist binding
激动剂和拮抗剂结合后膜蛋白结构和功能变化的原子力显微镜研究
  • 批准号:
    BB/M503113/1
  • 财政年份:
    2014
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
    Training Grant
Agonist & Antagonist Activity and Binding on the TMD of hT1R3
激动剂
  • 批准号:
    7915254
  • 财政年份:
    2009
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
Imaging Dopamine D2 Agonist Binding Sites in Cocaine Dependence with [11C]NPA
使用 [11C]NPA 对可卡因依赖中的多巴胺 D2 激动剂结合位点进行成像
  • 批准号:
    7782808
  • 财政年份:
    2009
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
Imaging Dopamine D2 Agonist Binding Sites in Cocaine Dependence with [11C]NPA
使用 [11C]NPA 对可卡因依赖中的多巴胺 D2 激动剂结合位点进行成像
  • 批准号:
    7587737
  • 财政年份:
    2009
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
Agonist & Antagonist Activity and Binding on the TMD of hT1R3
激动剂
  • 批准号:
    7725379
  • 财政年份:
    2009
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
CONFORMATIONAL CHANGES AND MODE OF BINDING OF AGONIST TO ESTROGEN RECEPTOR
激动剂与雌激素受体的构象变化和结合方式
  • 批准号:
    7724014
  • 财政年份:
    2008
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
Molecular determinants of melanocortin 4 receptor for selective agonist binding
黑皮质素 4 受体选择性激动剂结合的分子决定因素
  • 批准号:
    7669106
  • 财政年份:
    2008
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
Agonist & Antagonist Activity and Binding on the TMD of hT1R3
激动剂
  • 批准号:
    7706667
  • 财政年份:
    2008
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
Molecular recognition of barbiturate enantiomers in agonist binding site of nicotinic acetylcholine receptor
烟碱乙酰胆碱受体激动剂结合位点巴比妥酸盐对映体的分子识别
  • 批准号:
    19791062
  • 财政年份:
    2007
  • 资助金额:
    $ 23.2万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
{{ showInfoDetail.title }}

作者:{{ showInfoDetail.author }}

知道了