Nogo受体抑制神经再生的作用及其分子机制

利用NgR cDNA构建诱饵质粒，采用酵母双杂交方法筛选与NgR特异性作用的下游蛋白分子基因，利用免疫共沉淀和western blot方法验证新蛋白与NgR的相互作用；并观察筛选蛋白对体外培养的小脑颗粒细胞的生长影响，明确其功能。根据NgR cDNA合成构建NgR反义寡核苷纳米粒子，以之治疗脊髓损伤大鼠，观察动物行为学、电生理、组织病理学变化；采用原位杂交和免疫组化方法检测治疗前后Nogo、NgR、MAG等的表达变化；利用HRP逆行示踪技术，观察对中枢神经元的逆行保护作用和对重要下行传导束再生的作用；并与Nogo和MAG抗体治疗的大鼠对比。本研究将发现介导NgR作用的下游蛋白质，阐明Nogo和NgR抑制神经再生的作用机理；证实NgR反义纳米粒子的改善中枢神经再生作用，且治疗效应优于单纯阻断Nogo 或MAG，并为进一步研究转基因动物和研发能改善神经再生的药物奠定坚实的理论和方法学基础。