提高诱导绵羊iPSC效率的miRNAs筛选与评价

批准号:
31560328
项目类别:
地区科学基金项目
资助金额:
40.0 万元
负责人:
史慧君
依托单位:
学科分类:
C1201.干细胞基础研究
结题年份:
2019
批准年份:
2015
项目状态:
已结题
项目参与者:
付强、马齐蔓、史梦婷、孟露萍、黄美玲
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中文摘要
绵羊胚胎干细胞(ESC)系的建立对获得与经济性状相关的基因修饰绵羊至关重要。然而,迄今为止,真正的绵羊ESC系尚未获得。诱导多能性干细胞(iPSC)技术的建立,对解决这一问题提供了新的契机,能利用iPSC代替ESC来生产基因修饰绵羊。目前,国内外研究绵羊iPSC虽已有报道,但重编程效率很低,获得的iPSC未证明能进行生殖系传递获得可育后代。miRNA是基因表达的转录后调节器,研究证明胚胎干细胞特异性的miRNAs能促进体细胞重编程。本课题组前期初步建立了诱导绵羊iPSC的平台,课题组拟在前期工作的基础上:1、筛选出促进绵羊体细胞重编程的miRNA或miRNAs组合;2、初步探索这些miRNA在重编程过程中的作用,优化绵羊iPSC诱导方案。该课题的开展有望建立一种高效获得绵羊iPSC的体系,有助于提高克隆效率,为获得真正的绵羊iPSC和ESC奠定基础。
英文摘要
Abstract:The establishment of ovine embryonic stem cell(ESC) is very important for the generation of economically relevant gene-modified sheep. However, ovine ESCs are still not available, which limit the generation of precise gene-modified sheep. The establishment of induced pluripotent stem cell(iPSC) technology hold great promise for solving the problem and can use the iPSC instead of ESC to generate transgenic animals. Recently the ovine iPSC have been reported, but the reprogramming efficiency is still very low and lack of evidence for germ line contribution. miRNAs are posttranscriptional modulators of gene expression and play an important role in many developmental processes. Researches showed that embryonic stem cell specific miRNAs can promote induced pluripotency. On the basis of the ovine iPSC induction platform, we will study as below: 1. screening the superior candidate miRNA or miRNAs combination for improve the efficiency of reprogramming of sheep somatic cells; 2. Partially Study the function of these miRNAs in the reprogram procedure. This study will not only establish a rapid and highly efficient iPSC reprogramming system but also provide a platform to explore the culture conditions for ovine iPSC and ESC.
绵羊胚胎干细胞(ESC)系的建立对获得与经济性状相关的基因修饰绵羊至关重要。然而,迄今为止,真正的绵羊ESC系尚未获得。诱导多能性干细胞(iPSC)技术的建立,对解决这一问题提供了新的契机,能利用iPSC代替ESC来生产基因修饰绵羊。目前,国内外研究绵羊iPSC虽已有报道,但重编程效率很低,获得的iPSC未证明能进行生殖系传递获得可育后代。miRNA是基因表达的转录后调节器,研究证明胚胎干细胞特异性的miRNAs能促进体细胞重编程。本项目完成3种绵羊体细胞分离及诱导成siPSC等工作,建立了8种限定性因子+p53干扰+过表达ASF1A高效诱导绵羊体细胞为siPSCs的方法;使用Solexa高通量测序完成正常绵羊体细胞和siPSCs的miRNAs差异表达谱;筛选获得诱导过程中添加miR-302a/b/c/d-367、miR-429-200a-200b和miR-290等能显著性增加siPSC诱导效率;研究发现miR-302a/b/c/d-367能靶向于E2F家族转录因子,抑制其表达而激活内源Sox2、Oct4和Nanog等iPSC标记蛋白的表达;建立了dCas9-SAM系统上调内源的限定性因子表达,提高绵羊体细胞重编程的效率。本项目的研究将为iPSC诱导效率的提高提供理论依据,也为获得真正的绵羊iPSC和ESC奠定基础。
期刊论文列表
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专利列表
Roles of bta-miR-29b promoter regions DNA methylation in regulating miR-29b expression and bovine viral diarrhea virus NADL replication in MDBK cells
bta-miR-29b启动子区DNA甲基化在调节MDBK细胞中miR-29b表达和牛病毒性腹泻病毒NADL复制中的作用
DOI:10.1007/s00705-016-3107-1
发表时间:2017-02-01
期刊:ARCHIVES OF VIROLOGY
影响因子:2.7
作者:Fu, Qiang;Shi, Huijun;Chen, Chuangfu
通讯作者:Chen, Chuangfu
Roles of p53 and ASF1A in the Reprogramming of Sheep Kidney Cells to Pluripotent Cells.
p53 和 ASF1A 在绵羊肾细胞重编程为多能细胞中的作用。
DOI:10.1089/cell.2015.0039
发表时间:2015-12
期刊:Cellular Reprogramming
影响因子:1.6
作者:Huijun Shi;Quang Fu;Guozhong Li;Yan Ren;Shengwei Hu;Wei Ni;Fei Guo;Mengting Shi;Luping Meng;Hui Zhang;Jun Qiao;Zhiru Guo;Chuangfu Chen
通讯作者:Chuangfu Chen
Bta-miR-2411 attenuates bovine viral diarrhea virus replication via directly suppressing Pelota protein in Madin-Darby bovine kidney cells
Bta-miR-2411 通过直接抑制 Madin-Darby 牛肾细胞中的 Pelota 蛋白来减弱牛病毒性腹泻病毒的复制
DOI:10.1016/j.vetmic.2018.01.002
发表时间:2018
期刊:Veterinary Microbiology
影响因子:3.3
作者:Shi Huijun;Fu Qiang;Li Shengnan;Hu Xinyan;Tian Ruixin;Yao Gang;Zhao Hongqiong;Wang Jinquan
通讯作者:Wang Jinquan
DOI:10.16437/j.cnki.1007-5038.2017.01.004
发表时间:2017
期刊:动物医学进展
影响因子:--
作者:刘升;孟露萍;张辉;付强;史慧君;陈创夫
通讯作者:陈创夫
Lentivirus-mediated bta-miR-193a Overexpression Promotes Apoptosis of MDBK Cells by Targeting BAX and Inhibits BVDV Replication
慢病毒介导的bta-miR-193a过表达通过靶向BAX促进MDBK细胞凋亡并抑制BVDV复制
DOI:10.9775/kvfd.2017.17428
发表时间:2017
期刊:Kafkas Universitesi Veteriner Fakultesi Dergisi
影响因子:0.7
作者:Hu Nana;Fu Qiang;Hu Shengwei;Shi Mengting;Shi Huijun;Ni Wei;Sheng JL;Chen CF
通讯作者:Chen CF
PSMC2调控外泌体和自噬影响马疱疹病毒I型复制的分子机制研究
- 批准号:32460879
- 项目类别:地区科学基金项目
- 资助金额:32万元
- 批准年份:2024
- 负责人:史慧君
- 依托单位:
紧密连接蛋白Occludin参与牛病毒性腹泻病毒复制的分子机制研究
- 批准号:32160829
- 项目类别:地区科学基金项目
- 资助金额:35万元
- 批准年份:2021
- 负责人:史慧君
- 依托单位:
牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白p7形成离子通道过程中辅助因子筛选及作用机制研究
- 批准号:31902271
- 项目类别:青年科学基金项目
- 资助金额:24.0万元
- 批准年份:2019
- 负责人:史慧君
- 依托单位:
国内基金
海外基金
