植物特有的类神经钙素B与激酶复合物(CBL1-CIPK23)的晶体结构测定及功能研究
结题报告
批准号:
31070651
项目类别:
面上项目
资助金额:
35.0 万元
负责人:
高伟
依托单位:
学科分类:
C0501.结构生物学
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
尚桂军、李锋、严孝金、赵子华、丁志强
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中文摘要
植物感知和应答环境信号,是植物生长和发育的重要生理过程,也是农业可持续发展的重要方面。钙离子是生物体感知和应答环境信号的重要信使。类神经钙素B蛋白(CBLs)是一类新发现的高等植物特有的感知及调控钙离子时空信号的"钙传感器"蛋白。其重要成员CBL1,它感受钙离子信号,并激活下游激酶CIPK23,引发一系列信号通路,提高了植物对干旱、高盐和钾贫瘠的耐受性。但功能机制尚不清楚。本课题拟解析CBL1及与CIPK23复合物的结构,揭示其耐受性功能与结构的关系及作用机理。研究在已克隆三种植物CBL1、CIPK23基因的基础上,利用重组表达、纯化获得复合物蛋白,通过复合物的结晶、优化、X-射线衍射数据收集、指标化、确定相位、结构解析最后确定三维结构。基于CBL1-CIPK23的结构基础,揭示植物耐受性功能与钙介导的CBL1与下游激酶CIPK23复合物结构的关系,分析植物抗性的分子机制
英文摘要
植物感知和应答环境信号,是植物生长和发育的重要生理过程。钙离子是生物体感知和应答环境信号的重要信使。类神经钙素B蛋白(CBLs)是一类新发现的高等植物特有的感知及调控钙离子时空信号的“钙传感器”蛋白。其重要成员CBL1,它感受钙离子信号,并激活下游激酶CIPK23,引发一系列信号通路,提高了植物对干旱、高盐和钾贫瘠的耐受性。.本项目首先克隆构建了AmCBL1的野生型和六个降低活化熵突变体的表达载体和融合MBP表达载体,表达目标蛋白,分离、纯化、结晶获得了适合衍射的单晶。在同步辐射衍射获得2.9Å的数据。处理后空间群为P21212,晶胞参数为a=99.87Å, b=114.42Å, c=63.80Å, alpha=β=r=90.00。通过复杂的分子置换和重原子SAD方法获得了该蛋白结构的初解,进一步的精修和结构功能分析尚在处理。.以AtCBL1和AtCIPK23为基础构建了AtCBL1和AtCIPK23的NAF结构域的共表达及共转化的表达载体,共转化表达、分离纯化获得了两个蛋白的复合物,筛选结晶获得了可衍射的单晶。但分辨率太低没有合适的数据。以AmCBL1的M33突变体蛋白和NAF结构域的表达载体,双抗性共同转化感受态细胞,表达、分离纯化获得复合物的蛋白样品。以甲基化修饰获得了相对单一成分的复合物蛋白,结晶筛选获得了可衍射的单晶。由于上海同步辐射机时的限制,在等待时间收集数据。
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DOI:--
发表时间:2011
期刊:安徽农业科学
影响因子:--
作者:严孝金;李锋;秦立廷;李倩倩;韩翠晓;冯舵;王笑梅;高伟
通讯作者:高伟
DOI:--
发表时间:2011
期刊:湖北农业科学
影响因子:--
作者:李锋;严孝金;韩翠晓;冯舵;李倩倩;高伟
通讯作者:高伟
DOI:--
发表时间:2011
期刊:Agricultural Science & Technology
影响因子:--
作者:严孝金;李锋;秦立廷;李倩倩;韩翠晓;冯舵;王笑梅;高伟
通讯作者:高伟
Crystallization and preliminary crystallographic analysis of a calcineurin B-like protein 1 (CBL1) mutant from Ammopiptanthus mongolicus.
沙冬青 (Ammopiptanthus mongolicus) 钙调神经磷酸酶 B 样蛋白 1 (CBL1) 突变体的结晶和初步晶体学分析。
DOI:10.1107/s1744309110039667
发表时间:2010
期刊:Acta crystallographica. Section F, Structural biology and crystallization communications
影响因子:--
作者:G. Shang;H. Cang;Zhijie Liu;W. Gao;R. Bi
通讯作者:R. Bi
DOI:--
发表时间:2012-08
期刊:中国生物工程杂志
影响因子:--
作者:冯舵;张阔;李倩倩;韩翠晓;高伟
通讯作者:高伟
植物特有的类神经钙素B蛋白及相互作用激酶复合物的晶体结构测定与抗性功能关系的研究
  • 批准号:
    30970578
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    8.0万元
  • 批准年份:
    2009
  • 负责人:
    高伟
  • 依托单位:
国内基金
海外基金