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Dnd1与Jun 的相互作用及其功能分析
结题报告
批准号:
81071628
项目类别:
面上项目
资助金额:
32.0 万元
负责人:
彭小宁
依托单位:
学科分类:
H1801.肿瘤病因
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
王光伟、张勇、杨智、颜峰、刘宁、魏科、于淼
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中文摘要
2005年作者所在的研究小组发现与小鼠睾丸生殖细胞瘤(TGCT)相关的Ter位点中Dnd1基因突变导致TGCT。最近申请人又利用酵母双杂交系统, 成功筛选到4个与Dnd1相互作用蛋白, 其中之一为Jun蛋白,初步证实了Dnd1和Jun的相互作用;并发现Dnd1 基因在HeLa细胞系中的过表达抑制细胞增殖和诱导细胞周期G1期阻滞。本课题拟在以上研究发现的基础上利用GST-pull down技术确定Dnd1与c-Jun之间的相互作用区域;用免疫共沉淀等技术证明Dnd1与c-Jun特异性与生理性的结合;用报告基因等技术检测Dnd1对c-Jun的反式激活功能的影响;用缺失和诱导c-Jun 表达的细胞系统来证明c-Jun是否为Dnd1介导的细胞增殖抑制所必须,并分析Dnd1与c-Jun相互作用与细胞转化表型的关系。这为明确Dnd1的信号转导与其致瘤机制建立基础。
英文摘要
申请人所在研究小组前期发现Dnd1突变导致了小鼠TGCT,Jun蛋白是申请人利用酵母双杂交系统筛选的四个与小鼠Dnd1相互作用的蛋白之一。在此基础上,申请人研究团队利用GST pull-down实验验证了Dnd1与Jun蛋白的相互作用,经Co-Ip及激光共聚焦显微镜检测证实在GC-1细胞内这两种蛋白的存在特异性和生理性的结合。在GC-1细胞内,双荧光素酶报告基因技术检测到Dnd1与Jun蛋白结合后促进AP-1报告基因反式激活。成功构建Dnd1稳定高表达的GC-1细胞系后,经CCK-8实验及流式细胞学检测发现高表达的Dnd1对促进GC-1细胞的增殖,抑制GC-1细胞凋亡, 这与预实验瞬间转染的结果不同,显然稳定细胞系结果更为可靠。与此同时,运用RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RIP)结合基因芯片检测发现Dnd1的靶标mRNA及共同参与的信号传递通路,免疫组化染色芯片检测发现Dnd1在人睾丸及多种肿瘤表达增高;我们还用我们建立的酵母栓杂交系统筛选了人Dnd1,初步发现了与人Dnd1相互作用的四个新基因。总之,Dnd1具有重要的生物学功能,调节细胞增殖及细胞周期等,Dnd1与蛋白及相关mRNA结合可能参与与多种肿瘤的发生和发展,详细的作用机制及信号传导通路还有待进一步研究。
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
多形性胶质母细胞瘤病人预后相关mRNAs与microRNAs的筛选、验证、及功能分析
  • 批准号:
    81472860
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    72.0万元
  • 批准年份:
    2014
  • 负责人:
    彭小宁
  • 依托单位:
国内基金
海外基金