灯盏花乙素拮抗缺血-再灌注诱导的微小血管内皮损伤

摘 要.目的：证实云南特有菊花短亭飞蓬属植物灯盏花（灯盏细辛）的主要有效成分灯盏花乙素（Scutellarin，SCU），对缺血再灌注（IR）或缺氧再给氧（HR）诱导的心脏及脑微血管内皮损伤（MED）具有保护作用，并揭示其细胞分子机制。方法：建立细胞、离体血管、整体动物三个层次的IR或HR致心脏及脑微小血管内皮损伤（MED）模型，主要应用Wire Myograph微血管张力检测技术，Western blot，ELISA及RT-PCR等检测技术，测定评价相关指标及功能因子变化。结果：1）在大鼠心脏、脑IR诱导的MED动物模型上：IR诱导大鼠CA/BA的内皮依赖性舒张损伤，SCU（45、90mg/kg，i.v.）明显拮抗IR诱导的MED损伤，PKG拮抗剂Rp-8-Br-cGMPS（50μg/kg，i.v.）可以逆转SCU的作用。 2）在离体大鼠冠脉（CA）、脑基底动脉（BA）及胸主动脉（TA）的血管HR诱导MED模型上：HR诱导大鼠离体血管CA/BA的内皮依赖性ACH舒张损伤，SCU(0.1-1000μM)拮抗HR诱导的MED；PKG抑制剂Rp-8-Br-cGMPS(4µM)明显抑制了SCU舒张血管作用，离子通道KATP、KCa、L-Ca2+对SCU舒张作用有一定的影响；SCU（12.5-200μM）对大鼠正常离体血管及HR处理TA、BA/CA上的JAK2，PKC, PKG, VASP及其磷酸化，具有明显影响。3）在人心脏微血管内皮细胞（HCMEC）及人脑微血管内皮细胞(HBMEC)及其HR细胞模型上：SCU（0.1-10μM）明显抑制正常HBMEC及HCMEC细胞的JAK2及其磷酸化产物p-JAK2的蛋白表达，同时明显增加VASP及其磷酸化产物p-VASP，PKG-1，PKCε及其磷酸化产物p-PKCε的蛋白表达；SCU（0.1-10μM）增强正常培养的HCMEC及HBMEC细胞中PKG-Ια, PKG-Ιβ,PKG-ⅡmRNA 水平。SCU（0.1-10μM）明显抑制HR诱导 JAK2, PKCα, PKG-Ια, PKG-Ιβ, PKG-ⅡmRNA水平的变化。结论：体内IR及体外HR诱导血管MED损伤， SCU对MED具有保护作用，机制主要与PKG-VASP信号通路，JAK及PKC密切相关，与离子通道KATP、KCa、L-Ca2+等部分相关。