基于BioTAP-XL技术的人源CALM-AF10小鼠白血病模型的建立及发病机制研究

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    81500132
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    18.0万
  • 负责人：
    易海
  • 依托单位：
    中国人民解放军西部战区总医院
  • 学科分类：
    H0809.白血病
  • 结题年份：
    2018
  • 批准年份：
    2015
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2016-01-01 至2018-12-31

项目摘要

CALM-AF10 leukemia appear to be most frequently associated with young patients, often accomplished with mediastinal invasion. CALM-AF10 accounts for approximately 2% of adult acute myeloid leukemia and 14% of childhood acute T lymphoblastic leukemia, associated with poor prognosis. The t(10;11)(p13;q14-21) translocation cause CALM gene fusion to AF10, driving leukemia transformation. The mechanism is not fully understood. BioTAP-XL cross linking methodology can not only reduce non-specific binding but also purified protein composition of chromatin associated complexes. We have cloned and characterized the CALM-AF10 fusion gene in previous work, and successfully constructed CALM-AF10-BioTAP high affinity expression vector. By using BioTAP-XL cross linking approach, as well as mouse bone marrow progenitor cell transfection, transplantation model, tandem affinity purification, mass spectrometry and next-generation sequencing technology, we try to deeply identify CALM-AF10 interacting protein and chromatin in leukemia cells, revealing its pathogenic molecular mechanism, finding new therapeutic targets, and developing individualized treatment plan.
CALM-AF10白血病多见于中青年患者，常伴纵膈浸润，约占成人急性髓系白血病的2%，儿童急性T淋巴细胞白血病的14%，预后极差。t(10;11)(p13;q14-21)染色体倒位致CALM与AF10基因融合从而导致白血病转化，但其致病机制并未明确。BioTAP-XL交联及串联亲和纯化技术可有效降低非特异性结合，并能同时纯化出相互作用蛋白及染色质成分。申请人在前期工作中克隆并鉴定了CALM-AF10融合基因，并成功构建了CALM-AF10-BioTAP高亲和力表达载体。本课题拟采用BioTAP-XL交联技术，并通过小鼠骨髓造血前体细胞基因转染、移植模型、串联亲和纯化、蛋白质组学及第二代深度测序技术，深入分析白血病细胞中CALM-AF10相互作用的蛋白质及染色质，揭示CALM-AF10致病分子机制，为寻找新的治疗靶点、实现个体化治疗提供理论依据。

结项摘要

CALM-AF10白血病多见于中青年患者，常伴纵膈浸润，预后极差。CALM与AF10基因融合从而导致白血病转化，但其致病机制并未明确。本课题成功构建了CALM-AF10-BioTAP高亲和力表达载体，通过工程细胞培养方法包装含CALM-AF10-BioTAP载体的逆转录病毒，并进行小鼠造血前体细胞转染及受体小鼠骨髓移植，在体外验证了CALM-AF10-BioTAP增强小鼠造血前体细胞的克隆形成能力，并成功构建CALM-AF10-BioTAP小鼠白血病动物模型，并对CALM-AF10下游通路进行了探讨。转染CALM-AF10后的白血病细胞株细胞表面ITGB3表达升高，同时ALDH1A1蛋白水平也明显增加，证明了CALM-AF10和ITGB3触发的干性通路相关，ITGB3能通过结合配体骨桥蛋白导致细胞内β-catenin蛋白表达升高从而促进白血病细胞对化疗药物敏感性降低。证实了ALDH1A1为ITGB3的下游效应分子。同时CALM-AF10促进了白血病细胞中RNA甲基化酶METTL3核酸及蛋白的表达，而对RNA去甲基化酶FTO的表达无明显作用，METTL3 shRNA能明显减弱METTL3的表达，敲减METTL3后，白血病细胞的克隆形成能力明显下降，提示RNA甲基化酶METTL3可能在CALM-AF10促进ITGB3的表达进而维持白血病干细胞干性中起重要作用。本研究初步揭示了CALM-AF10致白血病新机制，为寻找新的治疗靶点，实现个体化治疗提供理论依据。

项目成果

期刊论文数量（3）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
CALM-AF10与急性白血病关系的研究进展
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2017
  • 期刊：
    山东医药
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    曹文斋;易海;余茜
  • 通讯作者：
    余茜
Identify Distinct Prognostic Impact of ALDH1 Family Members by TCGA Database in Acute Myeloid Leukemia
通过 TCGA 数据库确定 ALDH1 家族成员对急性髓系白血病的独特预后影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2018
  • 期刊：
    Annals of Hematology & Oncology
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Yi Hai;Deng Rui;Fan Fangyi;Sun Haoping;He Guangcui;Lai Sihan;Su Yi
  • 通讯作者：
    Su Yi
Integrin alphavbeta3 enhances β-catenin signaling in acute myeloid leukemia harboring Fms-like tyrosine kinase-3 internal tandem duplication mutations: implications for microenvironment influence on sorafenib sensitivity.
整合素 alphavbeta3 增强含有 Fms 样酪氨酸激酶 3 内部串联重复突变的急性髓系白血病中的 β-连环蛋白信号传导：微环境对索拉非尼敏感性的影响
  • DOI：
    10.18632/oncotarget.9617
  • 发表时间：
    2016-06-28
  • 期刊：
    Oncotarget
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Yi H;Zeng D;Shen Z;Liao J;Wang X;Liu Y;Zhang X;Kong P
  • 通讯作者：
    Kong P

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东沙海区泥火山调查进展
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  • 发表时间：
    2021
  • 期刊：
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  • 作者：
    阎贫;王彦林;于俊辉;刘兴健;靳永斌;李鹏春;刘杰;钟广见;易海
  • 通讯作者：
    易海
含氟砌块的分子设计合成及其在合成含氟杂环化合物中的应用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2011
  • 期刊：
    上海大学学报(自然科学版)
  • 影响因子：
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  • 作者：
    蒋海珍;宋力平;罗会华;易海;朱仕正;郝健
  • 通讯作者：
    郝健

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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