人端粒酶逆转录酶基因沉默治疗喉癌的基础研究

设计并构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因特异的双链RNA(double stranded RNA，dsRNA)。将不同剂量的dsRNA转染体外培养的人喉鳞癌细胞系Hep-2、鼻咽癌细胞株CNE、人胚喉上皮细胞及人胚胎干细胞，观察受转染细胞的dsRNA摄入时间过程、hTERT mRNA 表达、端粒酶活性、细胞周期、原位凋亡、细胞超微结构变化及细胞活性等；检测dsRNA转染后P53蛋白、PCNA 蛋白、MRP(多药耐药相关基因蛋白)mRNA、c-myc mRNA变化。将dsRNA分子经荷瘤裸鼠瘤体内注射或静脉注射研究其活体抗瘤效应、比较此两种用药方式的优劣及其副作用大小。本项目将为hTERT基因沉默（gene silencing，或称RNAi）用于晚期喉癌基因治疗的一期临床试验提供直接的理论依据和实验基础；为hTERT基因沉默治疗各种恶性肿瘤提供实验参考；同时探讨头颈肿瘤演进的可能机制。