肝癌磁共振成像的高效靶向造影剂CS-LA@SPION的制备及应用基础研究

本课题组制备了肝细胞癌VEGFR-2靶向免疫磁性纳米探针（TTAC-0001-CLSN），圆满完成了4项计划研究内容。（1）制备了肝细胞受体显像剂99mTc标记的乳糖酸-壳聚糖复合物（99mTc-LA-CS）。利用核磁共振氢谱（1H NMR）对其进行了结构表征；体内γ照相观察注射显像剂后不同时间肝脏的放射性摄取；并进行体内生物分布分析，阐明了99mTc-LA-CS对肝细胞特异性摄取；（2）壳聚糖与乳糖酸偶联修饰超顺磁性氧化铁纳米颗粒（CS-LA@SPION），采用透射电镜与动态光散射纳米粒度分析仪对其进行形貌表征；MTT法检测细胞毒性；利用体内外MR成像验证磁性纳米粒对肝细胞的靶向增强作用；普鲁士蓝染色观察肝细胞铁颗粒摄取情况。证明了ASGP-R介导的CS-LA@SPION对肝细胞具有特异靶向性；（3）利用异硫氰酸荧光素（FITC）标记CS-LA@SPION，合成荧光-磁共振双功能纳米探针FITC-CS-LA@SPION，采用荧光显微镜和流式细胞仪检测与肝细胞体外结合情况；通过体外MRI成像观察细胞数量与MRI信号变化的关系，进一步证实和确认FITC-CS-LA@SPION对肝细胞具有较强的特异性结合力，具有作为多模式成像探针的潜力；（4）以乳糖酸和壳聚糖作为纳米载体，表面修饰VEGFR-2抗体和SPION，制备血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2）靶向磁共振分子探针，测定其水合粒径和Zeta电位；采用MTT法测定靶向探针对正常肝细胞HL7702和人肝癌HepG2细胞活性率的影响；免疫细胞荧光检测肝癌细胞VEGF表达；普鲁士蓝染色观察肝癌细胞铁颗粒摄取情况；采用荧光标记物Cy5.5标记，与HepG2细胞孵育后，用活体成像仪对细胞悬液进行荧光成像；体外MR成像验证VEGFR-2靶向MR分子探针对肝细胞癌的特异性增强作用。