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非天然氨基酸荧光标记新方法用于超高分辨率胰岛素囊泡定位研究

批准号：
31170818
项目类别：
面上项目
资助金额：
65.0 万元
负责人：
徐平勇
依托单位：
中国科学院生物物理研究所
学科分类：
生物学过程与代谢
结题年份：
2015
批准年份：
2011
项目状态：
已结题
项目参与者：
陆敬泽、郑丽、徐小兰、常浩、章永登、刘贝、张名姝、韩梅、夏志平
关键词：
非天然氨基酸标记超高分辨显微成像糖尿病

项目摘要

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项目成果

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中文摘要
非天然氨基酸标记技术和超高分辨显微成像技术是蛋白质标记和显微成像领域的前沿技术和研究方向。本课题首先将发展新的氨酰tRNA合成酶/tRNA正交体系，建立非天然氨基酸筛选和标记平台，拓展非天然氨基酸标记方法，并将该非天然发氨基酸标记技术从细胞水平发展到多细胞生物在体水平。然后将结合已有的光学成像方面的优势，发展全新的基于非天然氨基酸标记的超高分辨显微成像方法，并利用该方法，以转基因敲除糖尿病小鼠为模型，研究胰岛素致密核心大囊泡在糖尿病小鼠与正常小鼠胰腺beta细胞中的超高分辨定位差异。总之，本课题拟将非天然氨基酸标记技术和超高分辨显微成像技术相结合，发展全新的基于非天然氨基酸标记的超高分辨成像技术，有利于促进蛋白质标记技术和超高分辨成像技术的双重发展。
英文摘要
为了实现超分辨率胰岛素囊泡定位，发展了一系列荧光标记方法。按照研究计划，优化了在线虫中的非天然氨基酸标记条件，并将UAA标记到荧光蛋白中。发展了能特异标记自噬溶酶体的新型荧光探针、用于胰岛素囊泡定位的蛋白标记方法，通过非天然氨基酸标记实现了对目标蛋白实时定位和功能调控。研究了STIM1调控CRAC通道的分子机制和spin-1通过调控溶酶体的功能参与了线虫脂代谢过程。. 此外，还发展了一系列可以用于超高分辨显微成像标记的可逆光激活荧光蛋白和光转化荧光蛋白mEos3、mGeos、Skylan系列，这些荧光蛋白在多种成像方法中表现优异，并且改善了超分辨方法，实现快速计算FID3B。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
Rational design of true monomeric and bright photoactivatable fluorescent proteins
真正的单体和明亮的光激活荧光蛋白的合理设计
DOI： 10.1038/nmeth.2021
发表时间： 2012-07-01
期刊： NATURE METHODS
影响因子： 48
作者： [Zhang, Mingshu, Chang, Hao, Xu, Tao]
通讯作者： Xu, Tao
A sensitive and quantitative autolysosome probe for detecting autophagic activity in live and prestained fixed cells
一种灵敏的定量自溶酶体探针，用于检测活细胞和预染色固定细胞中的自噬活性
DOI： 10.4161/auto.24241
发表时间： 2013-04
期刊： Autophagy
影响因子： 13.3
作者： [Hai, Yang, Tang, Juan, Zhang, Jun-Long, Xu, Pingyong]
通讯作者： Xu, Pingyong
Light-induced protein translocation by genetically encoded unnatural amino acid in Caenorhabditis elegans
DOI： --
发表时间： 2013
期刊： Protein & Cell
影响因子： 21.1
作者： [Chen, Runsheng, Zhang, Junlong, Xu, Tao, Xu, Pingyong, ]
通讯作者：
Bayesian localization microscopy based on intensity distribution of fluorophores.
基于荧光团强度分布的贝叶斯定位显微镜
DOI： 10.1007/s13238-015-0133-9
发表时间： 2015-03
期刊： PROTEIN & CELL
影响因子： 21.1
作者： [Xu, Fan, Zhang, Mingshu, Liu, Zhiyong, Xu, Pingyong, Zhang, Fa]
通讯作者： Zhang, Fa
共 9 条
    高通量双光子荧光蛋白筛选和全脑功能成像系统
    • 批准号：
      21927813
    • 项目类别：
      国家重大科研仪器研制项目
    • 资助金额：
      762.03万元
    • 批准年份：
      2019
    • 负责人：
      徐平勇
    • 依托单位：
      中国科学院生物物理研究所
    活细胞超高分辨SIMBA成像探针和方法研究
    新型荧光蛋白改造以及新型活细胞超高分辨显微成像方法研究
    新型荧光蛋白改造用于超高分辨显微成像研究
    国内基金
    海外基金