miRNAs介导Runx2调控成骨分化的分子网络解析

批准号：

81071524

项目类别：

面上项目

资助金额：

36.0 万元

负责人：

孙奋勇

依托单位：

同济大学

学科分类：

运动系统疾病研究新技术与新方法

结题年份：

2013

批准年份：

2010

项目状态：

已结题

项目参与者：

翁文浩、李益广、邱垂源、杨松海、许闪闪、贺文妃、何丽梅

关键词：

成骨分化小分子RNA Runx2 表观遗传学

项目摘要

结项摘要

项目成果

孙奋勇的其他基金

相似基金

相关文献

中文摘要

近年来全球的骨相关疾病的发病率有不断攀升的趋势,因此研究成骨过程的分子机制对于临床治疗有较大的指导意义。在骨形成过程中，蛋白编码基因与小分子RNA相互调控，构成一个十分复杂的调控网络，共同决定了干细胞的分化方向。Runx2作为成骨过程中最关键的一个转录因子，在其中起到决定性作用。前期研究中，我们通过Tet-on表达系统实现了Runx2在成肌干细胞C2C12中的稳定可调控表达，通过高通量的筛选方法找到20余种接受Runx2的调控并能够介导Runx2的促成骨分化作用的miRNAs，记作OsteomiRs。.本研究将结合蛋白组学、基因芯片与基本分子生物学技术，对候选OsteomiRs作用的靶基因进行全面鉴定与功能验证；通过表观遗传学方法系统研究Runx2调控候选OsteomiRs启动子的分子机制。本项目的完成将是第一次全面深入揭示成骨过程中，蛋白-miRNA调控网络的组成与相互关系。

英文摘要

在C2C12，MC3T3-E1及C3H10T1/2中稳定过表达Runx2后进行的ALP活性分析结果揭示Runx2在C2C12中促成骨分化能力最强，并利用Tet-on advanced基因表达系统在C2C12中分两步建立C2C12/Runx2Dox。.靶基因在线预测 (DIANA.microT, miRWalk与miRDB)发现mir-690在Rela/p65 3’UTR存在三个结合位点；Real-time PCR及Western blot检测结果表明Runx2对Rela/p65的转录无调节作用，但可抑制其在蛋白水平的表达。mir-690模拟物转染C2C12/Runx2Dox后进行Real-time PCR及Western blot分析发现mir-690可抑制Rela/p65翻译而不降解其mRNA；mir-690模拟物与psiCHECKTM-2-Rela/p65 3’UTR载体共转染C2C12/Runx2Dox后检测luciferase活性发现mir-690可抑制海肾荧光素酶表达，表明mir-690可靶向抑制Rela/p65翻译。Real-time PCR结果揭示过表达Rela/p65可抑制Runx2诱导的成骨分化 (抑制Alp及OC表达)。结果说明mir-690可靶向抑制Rela/p65翻译，促进成骨分化。.Real-time PCR结果揭示：Rela/p65过表达可靶向激活IL-6；Runx2过表达可抑制IL-6； IL-6过表达可抑制Runx2诱导的成骨晚期分化 (抑制OC表达)，但对早期分化没有影响(对Alp无影响)。结果说明Rela/p65靶向激活IL-6以抑制Runx2诱导的晚期成骨分化。

期刊论文列表

专著列表

科研奖励列表

会议论文列表

专利列表