雌激素通过与雌激素受体（Estrogen Receptor，ER）结合和/或受体外途径参与机体多种生理和病理生理过程，然而机制尚未明确。本项目拟以氯通道与雌激素-雌激素受体作用的关系作为切入点，着重探讨雌激素对氯通道的作用是否依赖于雌激素受体的表达？如果是，何种或哪几种雌激素受体亚型在其中起作用？雌激素激活氯通道的途径是经核启动的应答、还是膜启动的应答？参与雌激素诱导氯电流的氯通道分子基础? 经过3年的努力，按计划顺利完成课题主要的研究内容。17-E2可成浓度依赖性的激活乳腺癌MCF7（ER与ER均阳性）细胞氯电流，该电流可以被雌激素受体（同时也是氯通道阻断剂）tamoxifen所阻断，部分细胞可以被纯雌激素受体抑制剂Faslodex（主要是破坏ER结构和阻断雌激素与ER之间的相互作用）阻断，预先给予Faslodex则使17-E2对氯电流的激活作用消除，但不能影响低渗激活的氯电流；在不表达ER，但表达ER的乳腺癌DA-MB-231细胞氯通道的活动则不受17-E2的影响；通过siRNA干扰MCF-7细胞的ER的表达发现17-E2敏感的氯电流消失；慢病毒包装质粒转染ER阴性的DA-MB-231细胞，使其ER的表达上调，则可诱导17-E2敏感的氯电流。上述结果表明雌激素以ER依赖性的方式激活氯通道。进一步实验发现：ER阳性的MCF-7细胞和ER阴性的MDA-MB-231细胞表达ClC-2,3,4,5,6,7氯通道，不表达ClC-1氯通道，荧光定量PCR和Western Blot结果显示ClC-3氯通道在MCF-7细胞呈高表达。siRNA干扰ClC-3氯通道蛋白表达后，17-E2敏感的氯电流消失，抑制了MCF-7细胞增殖，然而对MDA-MB-231细胞几无影响，而转染了ER的MDA-MB-231细胞增殖则显著被ClC-3 siRNA所抑制。用激光共聚焦显微成像技术观察到17-E2作用5分钟即可引起ER和ClC-3蛋白亚细胞定位发生改变，从对照状态时主要分布于核内向细胞膜转移并存在共定位现象。本项目的完成为雌激素作用机制提供新的实验证据，拓展和加深了对雌激素作用机制的认识，ClC-3氯通道蛋白可望作为临床抗雌激素靶向治疗的筛选分子。