neuroplastin 65 对脑卒中神经保护作用及其机制的研究

批准号：

81070987

项目类别：

面上项目

资助金额：

32.0 万元

负责人：

袁琼兰

依托单位：

同济大学

学科分类：

神经损伤、修复与再生

结题年份：

2013

批准年份：

2010

项目状态：

已结题

项目参与者：

管强、赵江明、何晶、曹春燕、黄良、刘娟、张凯

关键词：

脑卒中神经保护神经再生 np65 down 海马与皮质神经元 knock

项目摘要

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项目成果

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中文摘要

neuroplastin65(np65)是脑特异性的突触膜糖蛋白，参与突触可塑性。我们的实验发现np65促进小脑颗粒细胞和海马神经元突起生长、促进神经元存活。np65 是否是一新的神经保护剂？本课题拟用np65 knock down 的小鼠(np65+/- )，首先体外培养其海马和皮质神经元，观察神经突起的生长；制备培养神经元损伤模型，观察神经元的存活率；其次制备np65+/-小鼠脑卒中模型，通过动物神经功能评分和脑梗塞体积观察np65 对脑卒中的神经保护作用；用Western blotting 、TUNEL 染色、Elisa、免疫双标等方法从神经元凋亡、神经再生、神经组织重塑、神经营养因子等方面初步探讨其机制；最后电生理研究np65+/-小鼠的突触可塑性。本研究结果将阐明np65 的新功能-神经保护及机制，有助于认识脑的发育与可塑性，并可能为脑卒中等神经疾病的治疗开发一新的神经保护剂。

英文摘要

本项对项目的完成情况及取得成果做简单概述，目根据研究计划，完成了全部的研究内容。研究成果：1 制备了np65基因敲除（NP65-/-)小鼠，体内和体外海马神经元培养，免疫染色显示NP65(-/-) 小鼠海马神经元表达MAP-2而不表达NP65；2 NP65(-/-) 对神经突起生长的影响：海马神经元培养48 h，与野生型相比，NP65(-/-) 小鼠海马神经元神经突起的长度和最长突起长度较野生型的短；初级突起的数目比野生型的多；次级突起的数目和长度无显著差别。此外，MEK1/2 的特殊抑制剂U0126、JNK inhibitor的特殊抑制剂SB203580和p38MAPK的SP600125，显著抑制了野生型和NP65(-/-) 小鼠的神经突起的长度都（P<0.05）；3 NP65(-/-) 不影响马神经元的活性：海马神经元培养4天，Hoechst 33258 染色和CCK 试剂盒分析，均显示，NP65(-/-) 对海马神经元活性没有影响；4 NP65(-/-)增强小鼠的认知能力：水迷宫实验显示，NP65(-/-)基因敲除小鼠穿越平台的次数较野生型显著增加；逃避时间比野生型显著减少，提示NP65（-/-）小鼠学习和记忆功能较较野生型好；5.NP65(-/-) 小鼠GFAP细胞数量显著增加：尼氏染色显示神经元胞体的形态特点在NP65(-/-)和野生型小鼠之间没有差异，但是NP65(-/-)小鼠的海马神经元密度比野生型显著增加，而在皮质两组之间没有差别；GFAP 免疫染色显示NP65(-/-)小鼠海马和大脑皮质的星形胶质细胞的数量较野生型显著增加；6 NP65(-/-) 抑制长时程增强效应：制备小鼠海马脑片，神经电生理实验发现NP65(-/-) 能诱导兴奋性突触后电位，但不能维持。7 高尔基染色显示NP65(-/-)成年小鼠神经突起数目多； 8 制备脑卒中动脉模型，线拴法制备小鼠大脑中动脉阻塞模型，让动物存活1周，实验结果：（1）NP65(-/-)小鼠神经功能损伤程度比野生型轻；（2）TTC 染色显示，脑卒中1周时，NP65(-/-)小鼠脑梗塞体积比野生型小；（3）尼氏染色显示，NP65(-/-)小鼠海马和齿状回的神经元数量比野生型小鼠的多；（4）TUNEL染色显示，NP65(-/-)小鼠海马神经元凋亡的数量比野生型的少。

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