MicroRNA-137靶向调控基因CUL4A和CLPX在多发性骨髓瘤耐药中的作用及机制研究

多发性骨髓瘤（mμltiple myeloma, MM）是中老年人群常见的血液系统肿瘤，探索MM耐药的机制、确定新的治疗靶点，寻求新的干预政策对于提高MM的疗效具有特殊的重要性和紧迫性。MicroRNA是一类长度在22nt左右的非编码RNA基因产物，通过与mRNA的3’UTR结合而介导翻译水平的调控。研究表明某些miR-137在结直肠癌、肺癌、黑色素瘤等多种恶性肿瘤的发生发展中起着重要的作用。本研究旨在探讨多发性骨髓瘤中miR-137表达水平，并探讨miR-137在多发性骨髓瘤耐药中的作用。.检测43例MM初治患者骨髓标本，5株骨髓瘤细胞系(NCI-H929、U266、KMS11、OPM2、RPMI8226)，以及正常供者骨髓标本。经磁珠分选患者标本CD138+细胞，提取RNA，采用实时定量PCR检测miR-137的表达情况；提取DNA，经亚硫酸氢盐处理后分别进行甲基化特异性PCR、亚硫酸盐测序和焦磷酸测序的方法检测MM细胞系和MM病人标本中CD138+细胞中miR-137的甲基化状态。分析其甲基化状态与miR-137表达的关系。将慢病毒包装的miR-137高表达载体感染骨髓瘤细胞系NCI-H929，获得稳定细胞系后，使用流式细胞术检测细胞凋亡、CCK-8法增殖、药物敏感性以及染色体不稳定性，并研究确定其靶基因。.结果表明， 相比正常供者，miR-137在MM细胞系和患者标本中表达明显降低，且与患者预后密切相关。其启动子区域甲基化相关检测显示在MM细胞系和MM患者标本CD138+细胞中Mir-137启动子区域存在明显甲基化。通过Cck-8, 克隆形成试验以及凋亡实验等表明，在骨髓细胞系中miR-137过表达可以抑制细胞增殖、增加药物敏感性；CGH-array 分析 显示miR-137过表达可降低NCI-H929细胞的染色体不稳定性，如1q21扩增, 1p22.2, 14q, 17p13缺失。体内实验也证实miR-137过表达可减少小鼠荷瘤体积以及增加小鼠生存时间。进一步研究发现，miR-137是通过靶向AURKA在MM耐药和染色体不稳定性上发挥作用的。.结论：miR-137在MM中表达明显降低，并且其靶向的AURKA表达增高，使得MM易发生耐药和染色体不稳定。