系统性红斑狼疮相关的一个新基因CD40/CD154信号通路分子表达调控的分子机制研究

Systematic lupus erythematosus（SLE） as a autoimmune disease which is seriously harm to human health, however, its etiology and pathogenesis have not yet fully understood. CD40/CD154 gene is a new gene, which may be involved in the incidence of SLE, In the previous Guangxi Natural Science Foundation study, we found that CD40/CD154 serum levels expression was significantly increased in rats with SLE, but its mechanism involved in the incidence of SLE is not clear. Up to date, No CD40/CD154 genes in clinical research on disease with SLE. Based on the previous basis, CD40/CD154 gene single nucleotide polymorphisms were examined in disease with SLE by the single base extension PCR technology. Analyze association the gene mutation of CD40/CD154 with SLE. CD40/CD154 gene mRNA and protein expression of different genotypes in patients with SLE were detected by Real-time PCR and Flow cytometry technology. To analysis CD40/CD154 gene mutations may affect SLE through the mRNA expression and protein levels of CD40/CD154 gene, and to study CD40/CD154 gene expression and its function of regulation. Reveal the molecular mechanism of CD40/CD154 gene in occurrence and development of SLE.

系统性红斑狼疮(SLE）是严重危害我国人群的一种自身免疫性疾病，然其病因和发病机制尚未完全阐明。CD40/CD154分子基因是新近发现的可能参与SLE发生的一种新基因。在上一个课题研究中我们发现CD40/CD154血清水平的表达在SLE大鼠中明显增高，但他通过何种机制起作用尚不清楚。截止目前未见CD40/CD154基因在临床SLE疾病上的研究，在已有的前期基础上，本课题采用分子生物学技术对SLE患者进行CD40/CD154基因SNP检测；分析CD40/CD154基因突变与SLE的关系。用Real-time PCR和流式细胞等技术分别检测不同基因型SLE患者CD40/CD154基因mRNA和蛋白的表达情况。分析CD40/CD154基因突变对mRNA表达丰度及蛋白表达水平的影响，探讨CD40/CD154基因表达调控的功能，揭示CD40/CD154基因在SLE患者发生、发展中的分子作用机制。

本课题采用单碱基延伸的分子生物学技术检测CD40-CD154（CD40L）家族基因共12个位点多态性，探讨CD40和 CD154基因单核苷酸多态性各等位基因及基因型在中国广西地区人群中的分布频率，比较其在不同种族间分布的差异；并分析CD40和 CD154基因多态性与SLE的相关性；同时采用流式细胞术和ELISA技术检测SLE患者及正常对照组中CD40和 CD154的蛋白表达情况，并分析CD40和 CD154的蛋白表达量与SLE的关系；采用Real-time PCR技术检测CD40和 CD154 mRNA在SLE及正常人外周血单个核细胞中的表达情况，分析CD40和 CD154基因与SLE的相关关系，探讨CD40和 CD154基因在SLE发生中的可能作用及其临床意义。研究结果表明：① 建立了PCR-SBE法检测CD40和 CD154基因型的检测技术；同时建立了用流式细胞术和ELISA技术检测CD40和 CD154蛋白表达的检测技术；成功建立了实时荧光定量PCR的CD40和 CD154 mRNA检测方法，扩增效率高，重复性好。② 研究结果表明CD40-CD154家族基因在中国广西人群中存在基因多态性，但与其他种族人群比较存在显著性差异，这种差异对于人类学的研究可能起重要的作用。③ 本次研究发现CD40基因rs1883832 C/T多态性可能与SLE具有相关性，其中T等位基因可能是SLE的遗传易感基因；同时发现CD154基因rs1126535 T/C多态性在两组人群中的分布差异也存在显著性(P<0.05)，rs1126535 C等位基因携带者患SLE的风险是T等位基因的1.9倍，其中rs1126535 C等位基因可能是SLE的遗传易感基因。④ 研究发现CD40和CD154 mRNA在SLE外周血单个核细胞中的表达显著高于对照组（P<0.01）；同时发现在SLE中CD40和 CD154血清蛋白表达水平显著高于对照组（P<0.01）。 ⑤ 本次发现CD40 基因rs1883832 C/T多态性可能影响CD40 mRNA的表达水平及CD40血清中的蛋白表达水平，携带突变等位基因型的个体可促进CD40 mRNA及CD40的蛋白高度表达进而增加了SLE的发病风险。上述成果为进一步研究CD40-CD154家族基因的功能提供了实验基础；为SLE的预防、基因诊断和基因治疗提供了理论依据。

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