TAP26磷酸化调控SP-B基因表达的研究
结题报告
批准号:
81070059
项目类别:
面上项目
资助金额:
32.0 万元
负责人:
柴新群
依托单位:
学科分类:
H0109.急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
邓飞涛、高金波、帅晓明、叶伦、陈俊华、胡志坚、柏立山、李彦旭
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中文摘要
人肺表面活性蛋白B( SP-B)是调节肺器官分化、降低肺泡表面活性张力的重要蛋白质。急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的发病机制复杂,有关特异性肺表面活性蛋白在ARDS发病及治疗中的作用已成为新的研究热点。研究表明: TTF-1相关蛋白26 (TAP26)能与TTF-1形成蛋白复合物共同促进SP-B基因表达。我们前期研究发现:TAP26核定位信号位点S66消失将明显影响其对SP-B基因的调控。本课题拟采用定点诱变、细胞共转染、ChIP及EMSA等技术,探讨TAP26磷酸化对SP-B基因表达的影响, 揭示TAP26、TTF-1对SP-B基因调控的分子机制;同时运用免疫组化双染色、Western blot、Real-time PCR等方法定性及定量研究ARDS模型鼠肺组织细胞中TAP26、TTF-1及SP-B的分布情况,为揭示SP-B基因在ARDS发病机制中的作用并探索新的治疗策略提供理论依据。
英文摘要
摘要:.背景:人肺表面活性蛋白B( SP-B)是调节肺器官分化、降低肺泡表面活性张力的重要蛋白质。急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺表面活性蛋白(SPs)功能严重受损,提示肺泡上皮细胞损伤导致的内源性肺泡表面活性蛋白代谢异常、缺乏可能是重要原因,有关特异性肺表面活性蛋白在ARDS发病及治疗中的作用已成为新的研究热点。研究表明: TTF-1相关蛋白26 (TAP26)能与TTF-1形成蛋白复合物共同促进SP-B基因表达。我们前期研究发现:TAP26核定位信号位点S66消失将明显影响其对SP-B基因的调控。.方向:本课题将在前期研究结果和合理构思的基础上,观测核蛋白TAP26磷酸化位点突变体对TTF-1在细胞内定位、与TTF-1相互作用及其对SP-B基因表达调控作用的影响。并且初步定量及定性分析ARDS死亡大鼠模型肺组织中TAP26、TTF-1和SP-B在肺泡Ⅱ型细胞核内的分布情况,并与正常肺组织进行比较。.主要内容:(1)TAP26磷酸化位点突变体的构建及条件优化;(2)TAP26双重磷酸化位点突变体的构建及条件优化;(3)明确TAP26对SP-B基因表达起关键作用的磷酸化位点;(4)明确TAP26关键的磷酸化位点突变体与TTF-1相互作用形成复合物的影响。.重要结果:(1)运用体外细胞共转染和荧光素酶报告基因检测技术等方法,找到TAP26关键的磷酸化位点为S66。(2)结果发现:在转染的H441细胞,突变体TAP26(S66→A66)对hSP-B启动子活性没有促进作用(P<0.05)。(3)通过实验得出:TAP26核定位信号S66位点的消失,将影响TAP26与TTF-1形成复合物,从而不能与TTF-1相互作用促进hSP-B启动子活性。于是推测:TAP26的S66PKC磷酸化位点是TAP26能够易位到细胞核,从而能与TTF-1相互作用以促进hSP-B转录的重要部位。.科学意义:加强对SP-B基因表达调控机制的研究并初步探索SP-B基因在ARDS发病机制中的作用将有助于我们寻找出对ARDS发病机制及治疗研究中起特异作用的基因,为揭示SP-B基因在ARDS发病机制中的作用并探索新的治疗策略提供理论依据,具有重要经济及社会价值。
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DOI:--
发表时间:2012
期刊:国际外科学杂志
影响因子:--
作者:柴新群
通讯作者:柴新群
DOI:--
发表时间:2013
期刊:世界华人消化杂志
影响因子:--
作者:柴新群
通讯作者:柴新群
DOI:--
发表时间:2013
期刊:医学分子生物学杂志
影响因子:--
作者:柴新群
通讯作者:柴新群
DOI:--
发表时间:2013
期刊:肝胆外科杂志
影响因子:--
作者:吴军卫;李锦锦;柴新群
通讯作者:柴新群
DOI:--
发表时间:2012
期刊:国际外科学杂志
影响因子:--
作者:柴新群
通讯作者:柴新群
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