介导特定DNA转移多结构域嵌合蛋白的构建与鉴定

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AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    81101140
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    23.0万
  • 负责人：
    李霄
  • 依托单位：
    中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
  • 学科分类：
    H2809.医用生物材料与仿生材料
  • 结题年份：
    2014
  • 批准年份：
    2011
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2012-01-01 至2014-12-31

项目摘要

裸质粒DNA曾以其安全、便捷、廉价等优越性受到广泛关注，但质粒DNA转导效率低下、转染制剂毒性高、目的基因表达量不足等缺陷使其发展受限。GAL4是酵母转录激活因子，能特异识别并以二聚体形式结合UAS序列。GAL4的特异性DNA结合活性和核定位活性，可用于完成高效、低毒的DNA转导，具有在基因转导领域的研发潜质。Tat作为CPP，具有在胞外环境直接侵入胞内，甚至细胞核的功能，并已成功应用于将异源蛋白质、纳米微球、脂质体、噬菌体和病毒载体等外源物质导入细胞，显示了其在基因治疗非病毒载体领域的用途。本研究拟筛选利用GAL4的DNA识别/结合基元和Tat的核定位/入胞基元，构建一种具有特异性识别、结合质粒DNA，并将特定质粒DNA导入细胞/细胞核功能的重组蛋白/多肽。为基于质粒DNA的基因治疗非病毒载体提供一种高效、低毒的辅助转导系统，拓展裸质粒DNA的应用空间。

结项摘要

本研究利用GAL4 和HIV-1 Tat构建了一种新的基因工程嵌合蛋白TG和TNG。本研究通过荧光显微镜评估了TG或TNG介导的细胞转导功能，结果表明，HepG-2细胞与TG/pUAS-EGFP 和TNG/pUAS-EGFP 复合物共培养显示强绿色荧光，而HepG-2细胞与G/pUAS-EGFP和 NG/pUAS-EGFP复合物不显示荧光。这些结果表明含有Tat的融合蛋白TG或 TNG可介导高效的基因转移，并有效表达外源基因。 .通过MTT方法鉴定了TG 和TNG在HepG-2细胞内的抗肿瘤活性。结果显示TG/pUAS-Apoptin 和TNG/pUAS-Apoptin 不同程度地杀伤HepG-2细胞，而TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin之间的抗肿瘤效应没有明显差异。治疗剂量一定时，TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin的抗肿瘤效应具有一定的时间-效应关系。.通过AO/EB、DAPI、Caspases、△φ 和ROS方法检测，我们分析了TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin介导的抗肿瘤机制。结果显示TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin复合物可诱导HepG-2细胞凋亡。.通过小鼠模型可以观察到TG/pUAS-Apoptin 和TNG/pUAS-Apoptin的体内抗癌活性。结果显示TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin治疗组具有不同程度的抗肿瘤效应。而二者的抑制率没有明显差异。平均存活率结果显示TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin治疗组的存活率分别为66.7% 和83.3%，均明显高于盐水组、pUAS 和pUAS-Apoptin治疗组。另外，TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin 对IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的浓度和NK、CTL的活性没有影响。.总之， GAL4/147 对UAS具有特异性识别活性，Tat具有穿膜活性，本研究基于二者构建的融合蛋白TG 和TNG能够转染含有UAS序列的质粒，通过质粒内的Apoptin能有效抑制人肝癌细胞HepG-2生长，限制肿瘤动物模型生长。本研究为扩大裸质粒DNA的应用提供了新的空间。

项目成果

期刊论文数量（10）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
重组腺病毒Ad-HP对肝癌细胞及肝癌肺转移模型的抑制效应
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    齐延新;王浩然;李霄;王卓越;胡宁宁;郭欢欢;吴娜;金宁一
  • 通讯作者：
    金宁一
Therapeutic efficacy of an hTERT promoter-driven oncolytic adenovirus that expresses apoptin in gastric carcinoma
hTERT 启动子驱动的表达凋亡素的溶瘤腺病毒对胃癌的治疗效果
  • DOI：
    10.3892/ijmm.2012.1077
  • 发表时间：
    2012-10-01
  • 期刊：
    INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR MEDICINE
  • 影响因子：
    5.4
  • 作者：
    Liu, Lei;Wu, Wenbin;Chi, Baorong
  • 通讯作者：
    Chi, Baorong
Characterization of an attenuated TE3L-deficient vaccinia virus Tian Tan strain
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  • DOI：
    10.1016/j.antiviral.2012.10.002
  • 发表时间：
    2012-12-01
  • 期刊：
    ANTIVIRAL RESEARCH
  • 影响因子：
    7.6
  • 作者：
    Wang, Yuhang;Kan, Shifu;Jin, Ningyi
  • 通讯作者：
    Jin, Ningyi
strongAntitumor Effects of Newcastle Disease Virus Hemagglutinin-neuraminidase Used as a Molecular Adjuvant/strong
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  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    Chemical Research in Chinese Universities
  • 影响因子：
    3.1
  • 作者：
    季慧范;李霄
  • 通讯作者：
    李霄
Expression and Characterization of a Recombinant Truncated Capsid Protein of Hepatitis E Virus
戊型肝炎病毒重组截短衣壳蛋白的表达和表征
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES-CHINESE
  • 影响因子：
    1
  • 作者：
    Li Xiao;Qu Yong-Gang;Jia Peng;Liu Li-Ming;Ji Hui-Fan;He Dong-Yun;Jin Ning-Yi;Chi Bao-Rong
  • 通讯作者：
    Chi Bao-Rong

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  • 通讯作者：
    王西勃

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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