课题基金基金详情
介导特定DNA转移多结构域嵌合蛋白的构建与鉴定
结题报告
批准号:
81101140
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
23.0 万元
负责人:
李霄
学科分类:
H2809.医用生物材料与仿生材料
结题年份:
2014
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
李昌、郑颖、孙丽丽、阚式绂、王卓越、王宇航、胡宁宁
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中文摘要
裸质粒DNA曾以其安全、便捷、廉价等优越性受到广泛关注,但质粒DNA转导效率低下、转染制剂毒性高、目的基因表达量不足等缺陷使其发展受限。GAL4是酵母转录激活因子,能特异识别并以二聚体形式结合UAS序列。GAL4的特异性DNA结合活性和核定位活性,可用于完成高效、低毒的DNA转导,具有在基因转导领域的研发潜质。Tat作为CPP,具有在胞外环境直接侵入胞内,甚至细胞核的功能,并已成功应用于将异源蛋白质、纳米微球、脂质体、噬菌体和病毒载体等外源物质导入细胞,显示了其在基因治疗非病毒载体领域的用途。本研究拟筛选利用GAL4的DNA识别/结合基元和Tat的核定位/入胞基元,构建一种具有特异性识别、结合质粒DNA,并将特定质粒DNA导入细胞/细胞核功能的重组蛋白/多肽。为基于质粒DNA的基因治疗非病毒载体提供一种高效、低毒的辅助转导系统,拓展裸质粒DNA的应用空间。
英文摘要
本研究利用GAL4 和HIV-1 Tat构建了一种新的基因工程嵌合蛋白TG和TNG。本研究通过荧光显微镜评估了TG或TNG介导的细胞转导功能,结果表明,HepG-2细胞与TG/pUAS-EGFP 和TNG/pUAS-EGFP 复合物共培养显示强绿色荧光,而HepG-2细胞与G/pUAS-EGFP和 NG/pUAS-EGFP复合物不显示荧光。这些结果表明含有Tat的融合蛋白TG或 TNG可介导高效的基因转移,并有效表达外源基因。 .通过MTT方法鉴定了TG 和TNG在HepG-2细胞内的抗肿瘤活性。结果显示TG/pUAS-Apoptin 和TNG/pUAS-Apoptin 不同程度地杀伤HepG-2细胞,而TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin之间的抗肿瘤效应没有明显差异。治疗剂量一定时,TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin的抗肿瘤效应具有一定的时间-效应关系。.通过AO/EB、DAPI、Caspases、△φ 和ROS方法检测,我们分析了TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin介导的抗肿瘤机制。结果显示TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin复合物可诱导HepG-2细胞凋亡。.通过小鼠模型可以观察到TG/pUAS-Apoptin 和TNG/pUAS-Apoptin的体内抗癌活性。结果显示TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin治疗组具有不同程度的抗肿瘤效应。而二者的抑制率没有明显差异。平均存活率结果显示TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin治疗组的存活率分别为66.7% 和83.3%,均明显高于盐水组、pUAS 和pUAS-Apoptin治疗组。另外,TG/pUAS-Apoptin和TNG/pUAS-Apoptin 对IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的浓度和NK、CTL的活性没有影响。.总之, GAL4/147 对UAS具有特异性识别活性,Tat具有穿膜活性,本研究基于二者构建的融合蛋白TG 和TNG能够转染含有UAS序列的质粒,通过质粒内的Apoptin能有效抑制人肝癌细胞HepG-2生长,限制肿瘤动物模型生长。本研究为扩大裸质粒DNA的应用提供了新的空间。
期刊论文列表
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会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2012
期刊:中国兽医学报
影响因子:--
作者:齐延新;王浩然;李霄;王卓越;胡宁宁;郭欢欢;吴娜;金宁一
通讯作者:金宁一
DOI:--
发表时间:2012
期刊:CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES-CHINESE
影响因子:1
作者:Li Xiao;Qu Yong-Gang;Jia Peng;Liu Li-Ming;Ji Hui-Fan;He Dong-Yun;Jin Ning-Yi;Chi Bao-Rong
通讯作者:Chi Bao-Rong
DOI:--
发表时间:2013
期刊:Chemical Research in Chinese Universities
影响因子:3.1
作者:季慧范;李霄
通讯作者:李霄
Esophageal Cancer-Specific Toxicity of the Dual Specific Oncolytic Adenovirus Involves the Activation of Caspases by a Mitochondrial-Dependent Pathway.
双特异性溶瘤腺病毒的食管癌特异性毒性涉及通过线粒体依赖性途径激活半胱天冬酶。
DOI:--
发表时间:2012
期刊:Chem Res. Chinese Universities
影响因子:--
作者:Su Jia-qiang;Chi Bao-rong;Li Xiao;et al.
通讯作者:et al.
Anti-tumor effects of an oncolytic adenovirus expressing hemagglutinin-neuraminidase of Newcastle disease virus in vitro and in vivo.
表达新城疫病毒血凝素神经氨酸酶的溶瘤腺病毒的体外和体内抗肿瘤作用
DOI:10.3390/v6020856
发表时间:2014-02-18
期刊:Viruses
影响因子:--
作者:He D;Sun L;Li C;Hu N;Sheng Y;Chen Z;Li X;Chi B;Jin N
通讯作者:Jin N
靶向宿主VPS34蛋白的广谱抗冠状病毒机制及药物研究
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