人源高尔基体蛋白GRASP55的结构与功能研究

批准号:
31100528
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
25.0 万元
负责人:
徐春艳
依托单位:
学科分类:
C0501.结构生物学
结题年份:
2014
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
唐琳、王玉柱、陈鸣之、李健、许新磊、黄麟飞
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中文摘要
在哺乳动物细胞中,GRASP55是重要的高尔基体结构蛋白,参与高尔基堆及高尔基带的形成,维持高尔基体结构的完整性,GRASP55的磷酸化将导致高尔基体片段化进而参与细胞周期G2/M的调控,此外它和golgin-45在高尔基体中间膜囊形成rab2效应物,维持正常的蛋白运输, 也可作为偶联MT1-MMP与Furin的接头分子参与依赖于Furin的MT1-MMP激活。目前GRASP55功能研究主要是在细胞水平开展, GRASP55发挥功能的分子机制尚不明确,对GRASP55的三维结构的研究未见任何报道。本项目将从人源GRASP55的三维结构研究入手,结合小角散射等手段,期望通过结构的解析、蛋白相互作用模式的研究,进一步在分子水平甚至是原子水平上探索GRASP55发挥功能的结构基础及分子机制,从而为高尔基体结构蛋白研究开拓新的途径。
英文摘要
GRASP55是高尔基体的重要的结构蛋白,参与细胞内多种功能,比如蛋白质的运输、维持高尔基体的形态及完整性等。它主要由N端的GRASP结构域及C端的富含丝氨酸/脯氨酸的SPR结构域组成。本课题原计划通过克隆、表达并纯化GRASP55的N端结构域、C端结构域及全长蛋白,分别生长晶体,以期通过X射线晶体学的方法得到蛋白结构域或是全长蛋白的结构。在我们得到N端结构域的初筛晶体后,2011年和2012年陆续有两篇文章报道了GRASP55的N端结构域(残基1-208)及突变体S189D的结构后,我们把研究焦点转向C端结构域及全长蛋白的晶体生长,目前尚在努力尝试多种方法以期获得GRASP55蛋白全长及C端结构域的晶体。.此外我们扩展了研究范围,开展Ⅱ型限制性内切酶Sau3AI的结构与功能的研究工作、含金属离子介导的碱基配对的DNA样品及特定纳米结构的DNA样品的结晶及结构解析工作,取得了一些重要的进展。其中我们解析了Sau3AI蛋白2.45埃的晶体结构(PDB ID: 4PXG);,确定了其单体可以结合两个含有一个识别位点的DNA序列,并根据已报道的酶学性质,提出了其自抑制的酶活机制,文章已投递。我们解析了汞介导的胸腺嘧啶(T)配对的双链DNA样品的2.35埃晶体结构(PDB ID: 4R6M);获得了含有银介导的胞嘧啶(C)配对的双链DNA样品的晶体生长条件,收获可以衍射到2.2埃的数据一套,目前正在制备溴代胞嘧啶DNA样品的晶体,以解决相位问题并解析结构;此外,获得了边长为20个碱基的DNA四面体的晶体生长条件。
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Using Xe as a heavy atom for phase determination of protein trichosanthin structure
以 Xe 作为重原子进行蛋白质天花粉蛋白结构的物相测定
DOI:10.13538/j.1001-8042/nst.25.030502
发表时间:2014-06
期刊:Nuclear Science and Techniques
影响因子:2.8
作者:Chen Ya-Xing;Li Min-Jun;Yu Feng;Liu Ke;Xu Chun-Yan;Sun Bo;Zhou Huan;Xu Qin;He Jian-Hua
通讯作者:He Jian-Hua
DOI:10.1021/jm301793a
发表时间:2013-05
期刊:Journal of medicinal chemistry
影响因子:7.3
作者:Lele Zhao;D. Cao;Tiantian Chen;Ying-Qing Wang;Z. Miao;Yechun Xu;Wu-yan Chen;Xin Wang;Yanlian Li
通讯作者:Lele Zhao;D. Cao;Tiantian Chen;Ying-Qing Wang;Z. Miao;Yechun Xu;Wu-yan Chen;Xin Wang;Yanlian Li
Structural insights into the mechanism for recognizing substrate of the cytochrome P450 enzyme TxtE.
细胞色素 P450 酶 TxtE 底物识别机制的结构见解
DOI:10.1371/journal.pone.0081526
发表时间:2013
期刊:PloS one
影响因子:3.7
作者:Yu F;Li M;Xu C;Wang Z;Zhou H;Yang M;Chen Y;Tang L;He J
通讯作者:He J
Structure insights into mechanisms of ATP hydrolysis and the activation of human heat-shock protein 90
ATP 水解机制和人类热休克蛋白激活的结构见解 90
DOI:10.1093/abbs/gms001
发表时间:2012-04-01
期刊:ACTA BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA SINICA
影响因子:3.7
作者:Li, Jian;Sun, Lihua;He, Jianhua
通讯作者:He, Jianhua
DOI:--
发表时间:2012
期刊:核技术
影响因子:--
作者:黄麟飞;郁峰;徐春艳;唐琳;何建华
通讯作者:何建华
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