溶瘤性单纯疱疹病毒GD116的开发及其对人乳腺癌的治疗作用

背景：溶瘤性单纯疱疹病毒-1（oHSV-1）是一种有效的抗肿瘤载体，病毒基因组内γ34.5基因的删除确保了G47Δ溶瘤病毒载体的低神经毒性，但同时该基因的删除也减弱了病毒复制能力；有研究表明γ34.5的类似物MyD116的羧基端与前者高度同源，因此可代替前者而发挥促进病毒复制的作用。 .目的：将γ34.5-MyD116嵌合基因插入到G47Δ病毒基因组并构建新型病毒载体GD116-G47Δ，观察新型溶瘤病毒对人乳腺癌细胞的杀伤作用。 . 方法：以细菌人工染色体（BAC）系统作为基础，在菌体外，通过Cre/loxP位点特异性同源重组系统将CMV启动子及γ34.5-MyD116目的基因插入到G47Δ-BAC基因组内，通过电穿孔转化到大肠杆菌E.coli-DH10B内进行克隆；然后在Vero细胞内，再通过FLPe/FRT同源重组系统将γ34.5-MyD116-G47Δ-BAC基因组的BAC序列进行剪切，从而构建完整的GD116-G47Δ病毒载体；以同样的方法构建仅含CMV启动子不含目的基因的CMV-G47Δ载体作为对照组，检测新型病毒的复制能力以及对不同乳腺癌细胞株的毒性作用。 . 结果：通过同源重组系统成功构建了GD116-G47Δ及CMV-G47Δ两种病毒载体，在MDA-MB-231细胞中，新型溶瘤病毒GD116-G47Δ在感染后24小时及48小时的病毒复制产量明显高于对照组；当MOI=0.1及MOI=0.3时，GD116-G47Δ对乳腺癌细胞的毒性作用均强于对照组CMV-G47Δ。 . 结论及意义：MyD116的羧基端可替代γ34.5基因的羧基端，并抑制早期病毒蛋白合成的关闭，从而发挥促进溶瘤病毒在细胞内的复制；新型溶瘤病毒载体GD116-G47Δ对于乳腺癌细胞的杀伤能力强于CMV-G47Δ，从而为临床治疗乳腺癌提供新的思路。