p73和Sestrins在MEHP致ROS介导细胞凋亡中的调控机制

1. 研究背景：邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP) 是国内外优先控制的环境污染物。但是有关DEHP和邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(mono-2-ethylhexyl phthalate，MEHP)对人肝细胞毒性的分子机制研究十分有限。.2. 研究内容：DEHP(62.5μM、12.5μM、25.0μM、50.0μM和100.0μM)和MEHP(6.25μM、12.50μM、25.00μM、50.00μM和100.00μM)分别处理L-02、HepG2和Hep3B细胞24h和36h。用阻断PI3K/Akt通路技术研究PI3K-AKT-mTOR通路在DEHP致人肝细胞异常增殖中的调控机制。用RNA干扰技术(沉默p53)研究Fas/FasL参与p53非依赖性信号通路调控MEHP致L02细胞和HepG2细胞的凋亡机制。.3. 重要结果：①DEHP诱导人肝细胞(L-02、HepG2和Hep3B细胞)氧化性DNA损伤。p53、p73、sestrin1、sestrins2、和sestrins3 参与人肝细胞(L02细胞、HepG2细胞和Hep3B细胞)的增殖调控。②PI3K-AKT-mTOR细胞信号通路相关基因和蛋白(pi3k、akt、mtor和p70s6k)参与DEHP致Hep3B细胞增殖的调控。50μM LY294002明显抑制Hep3B细胞的异常增殖。③一定剂量MEHP可致人肝细胞(L-02、HepG2和Hep3B细胞)氧化应激、氧化性DNA损伤和凋亡。在L02细胞和HepG2细胞， MEHP上调pxr的转录水平，CYP3A4蛋白的表达及其酶活性，并活化线粒体信号通路。④MEHP处理细胞36h, p53-线粒体通路介导L02细胞和HepG2细胞的凋亡。RNA干扰p53基因后，Fas和FasL参与p53非依赖性信号通路调控MEHP致L02-p53和HepG2-p53细胞的凋亡。.4. 研究意义： DEHP和MEHP对三种人肝细胞毒作用不尽相同。p53缺失和PI3K-AKT-mTOR信号通路激活与DEHP致Hep3B细胞的异常增殖有关；p53-线粒体通路和Fas/FasL参与的p53-非依赖信号通路调控MEHP致L02细胞和HepG2细胞凋亡的调控。本研究结果为DEHP暴露人群健康效应的表型标志物研究提供依据