RBP-4对猪卵泡颗粒细胞增殖的影响及其机理研究
批准号:
31372308
项目类别:
面上项目
资助金额:
80.0 万元
负责人:
周虚
依托单位:
学科分类:
畜禽繁殖学
结题年份:
2017
批准年份:
2013
项目状态:
已结题
项目参与者:
陈璐、赵云、刘卓、李万宏、陈树雄、孙丽娜
中文摘要
视黄醇结合蛋白-4(RBP-4)是一种低分子量的载脂蛋白,其主要作用是结合和转运维生素 A。近年来国内外文献报道了RBP-4在繁殖过程中某些方面的作用,如促进子宫生长和胚胎发育。本课题组曾在国际上首次报道了猪囊肿卵泡液中含有高浓度的RBP-4,还发现猪卵泡颗粒细胞上表达RBP-4及其受体,体外培养的猪颗粒细胞可以分泌产生RBP-4。然而,RBP-4对卵泡发育的作用尚不清楚,对卵泡颗粒细胞的调节尚无报道。因此,本项目通过基因芯片、siRNA、细胞转染等技术,研究RBP-4在猪卵泡颗粒细胞增殖中的作用、下游基因、信号转导机制,为阐明RBP-4在母猪卵泡发育中的作用提供理论依据,期望为母猪卵泡囊肿的治疗提供新的靶点。
英文摘要
Retinol-Binding Protein 4 (RBP-4) is a low molecular weight lipocalin, which mainly functions as a carrier for vitamin A. Recent evidences have shown that RBP-4 plays important roles in animal reproduction, for example, increasing the development of uterus and embryo. Our laboratory firstly reported that high level of RBP-4 existed in follicular fluid from follicular cysts in sows. RBP-4 could be secreted by granulosa cells, and RBP-4 receptor was detected in granulosa cells. However, there is no any evidence on the regulation of RBP-4 in follicular granulosa cells. Techniques of gene chip, siRNA, cell transfection, etc. will be used to study the regulating roles of RBP-4 on proliferation of granulosa cells; and to study the genes and signal transduction in granulose cells regulated by RBP-4 from different aspects. The project will provide new theoretical evidences for the role of RBP-4 in the development of ovarian follicle, and further provide potentially therapeutic targets for follicular cysts of sows.
视黄醇结合蛋白-4(RBP-4)是一种低分子量的载脂蛋白,其主要作用是结合和转运维生素A。近年来国内外文献报道了RBP-4在繁殖过程中某些方面的作用,如促进子宫生长和胚胎发育。.为探明RBP-4在猪卵泡发育中的调节作用,本项目根据前期研究基础,以猪卵泡颗粒细胞为研究对象,利用不同实验手段,从不同角度,研究了RBP-4对猪卵泡颗粒细胞增殖的影响。.(1)研究了RBP-4在猪卵巢组织中的分布及在不同大小卵泡中的表达模式。免疫组化和PCR方法证实了猪卵泡颗粒细胞和内膜细胞表达RBP-4,而卵母细胞不表达。而且qRT-PCR和western blotting检测均证明,大卵泡RBP-4表达量显著高于中、小卵泡。.(2)研究了RBP-4与促性腺激素(FSH、LH)在猪卵泡颗粒细胞中的相互作用。qRT-PCR和western blotting检测发现,FSH、LH能促进猪卵泡颗粒细胞中RBP-4的表达,同时,RBP-4能够促进FSHR、LHR的表达。说明RBP-4与促性腺激素具有相互作用,二者协同促进颗粒细胞生长。.(3)研究了猪卵泡颗粒细胞过表达RBP-4后,对下游microRNA的调节。microRNA高通量测序筛选出81个差异miRNA,预测出7562个靶基因,其中数据库中已有记载的猪源差异miRNA为8个。其中上调3个:miR-142-3p_R2-22L22 、miR-18b_R1-16L23、 miR-32_R1-21L21,下调5个:miR-148a-5p_R1-21L22、miR-193a-3p、miR-378b-3p_R1-18L21、 miR-7857-3p_R1-22L22、ssc-miR-9788-3p_R1-15L22。挑选6个差异miRNA进行了验证,同时进一步研究了miRNA-193a-3p对颗粒细胞增殖的影响机制。.(4)研究了猪卵泡颗粒细胞过表达RBP-4后,对下游基因的调节。转录组高通量测序筛选出113个差异mRNA,71个基因上调,42个基因下调,这些基因参与多种细胞功能,进一步验证了ITGA5、MMP1和IGFBP5三个基因,并且重点研究了IGFBP5对细胞增殖影响的机制。.(5)利用原核表达系统体外表达了猪RBP-4蛋白,制作了RBP-4多抗,同时研究了RBP-4对猪卵母细胞体外成熟的研究。成功构建了猪RBP-4蛋白原核表达载体,成功表达
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DOI:
10.1016/j.anireprosci.2016.08.008
发表时间:
2016-10
期刊:
Animal reproduction science
影响因子:
2.2
作者:
[Chunjin Li;Dong Wang;Xu Zhou]
通讯作者:
Chunjin Li;Dong Wang;Xu Zhou
DOI:
10.1292/jvms.14-0617
发表时间:
2015-11
期刊:
The Journal of veterinary medical science
影响因子:
--
作者:
[Wang C, Li C, Li H, Ma W, Chen S, Zhao Y, Rao J, Zhou X]
通讯作者:
Zhou X
DOI:
--
发表时间:
2016
期刊:
中国兽医学报
影响因子:
--
作者:
[李洪蛟, 李纯锦, 陈璐, 周虚]
通讯作者:
周虚
NGF promotes mitochondrial function by activating PGC-1α in TM4 Sertoli cells
NGF 通过激活 TM4 支持细胞中的 PGC-1α 促进线粒体功能
DOI:
--
发表时间:
2017
期刊:
Andrologia
影响因子:
2.4
作者:
[蒋彦文, 赵云, 陈树雄, 陈璐, 李纯锦, 周虚]
通讯作者:
周虚
Altered expression of miRNAs in the uterus from a letrozole-induced rat PCOS model
来曲唑诱导的大鼠 PCOS 模型子宫中 miRNA 表达的改变
DOI:
10.1016/j.gene.2016.10.033
发表时间:
2017-01-20
期刊:
GENE
影响因子:
3.5
作者:
[Li, Chunjin, Chen, Lu, Zhou, Xu]
通讯作者:
Zhou, Xu
共 11 条
猪卵泡液外泌体miRNAs调控卵泡内膜细胞功能的分子机制
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批准号:32272872
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项目类别:面上项目
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资助金额:54万元
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批准年份:2022
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负责人:周虚
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依托单位:
miRNAs介导的BDNF调节猪卵泡颗粒细胞增殖的机制
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批准号:31772596
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项目类别:面上项目
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资助金额:60.0万元
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批准年份:2017
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负责人:周虚
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依托单位:
初情期前母猪性腺外促性腺激素受体表达研究
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批准号:30671511
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项目类别:面上项目
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资助金额:27.0万元
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批准年份:2006
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负责人:周虚
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依托单位:
国内基金
海外基金