应用小干涉RNA杀伤EBV阳性肿瘤细胞的研究

本课题拟将EBV潜伏期基因LMP1、EBNA2和早期基因BARF1和BHRF1特异性寡核苷酸片段插入带有RNA聚合酶Ⅲ依赖性启动子（H1-RNA）的质粒载体，构建能转录产生针对相应靶基因的siRNA转录载体。用siRNA转录载体转染EBV阳性肿瘤细胞系，以EBV阴性肿瘤细胞系作为细胞对照，非相关基因的siRNA作为实验对照。在mRNA和蛋白水平检测细胞中靶基因的表达，观察siRNA对靶基因的封闭效果以及对肿瘤细胞凋亡和增殖的影响。同时将siRNA转录载体注入以EBV阳性肿瘤细胞建立的荷瘤小鼠体内，观察siRNA干涉对肿瘤生长的抑制作用；或将以siRNA转录载体转染的EBV阳性肿瘤细胞接种裸鼠或SCID小鼠，观察siRNA干涉对异体接种致瘤的影响。从细胞水平、分子水平和机体水平分析肿瘤细胞凋亡的规律，深入探讨靶基因在EBV相关肿瘤中的作用，为病毒相关肿瘤的治疗提供特异性的新技术和新方法。