EB病毒相关胃癌抑癌基因甲基化异常及发生机制的研究

EB病毒(EBV)感染与部分胃癌的发生有关，本项目主要研究EBV参与胃癌发生的表观遗传学机制，筛选和鉴定EBV相关胃癌(EBVaGC)中由于EBV感染而沉默的抑癌基因，为深入探讨EBV诱导甲基化的机制提供实验依据。采用表达谱芯片检测分析甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理前后EBV阳性和阴性胃癌细胞系基因表达谱，筛选出与EBV相关的候选甲基化沉默基因。选择EBV阳性、阴性细胞系及各种临床指标匹配的EBVaGC和EBV阴性胃癌(EBVnGC)组织标本，对26条候选基因进行甲基化和表达验证分析，对部分基因进行功能和调控机制的初步研究，结果表明：WNT5A、LOXL1和Rb在EBV阳性细胞及EBVaGC中呈高甲基化状态和低水平表达，是EBV诱导甲基化而沉默的特异抑癌基因；Rb启动子基因甲基化和Rb蛋白表达缺失可以作为临床判断胃癌浸润和转移的参考指标；EBVaGC组织中EBV通过诱导甲基化对促癌基因CTHRC1起负调控作用；EBV可诱导TMEM130基因的甲基化，通过甲基化抑制其表达参与EBVaGC的发生。对EBV阳性细胞系、EBVaGC和EBV阳性鼻咽癌组织中EBV核抗原启动子Wp、Cp和Qp以及潜伏膜蛋白基因LMP1和LMP2A启动子甲基化状态的检测表明，EBV通过甲基化实现自身基因在特定细胞和组织中的限制性表达。EBV阳性胃癌细胞系中DNA甲基化转移酶(DNMT)1的表达水平高于EBV阴性细胞系，EBVaGC组织中DNMT1表达率高于EBVnGC，且DNMT1表达与WNT5A、LOXL1、Rb、CTHRC1和TMEM130的甲基化存在相关关系。本研究结果表明EBV可通过诱导DNMT1表达上调，影响自身基因以及宿主基因甲基化，进而参与EBVaGC的发生，对最终阐明EBV相关肿瘤的发生机制具有重要意义。