miR-608 rs4919510C/G 影响严重创伤患者预后的机制研究
批准号:
81272076
项目类别:
面上项目
资助金额:
70.0 万元
负责人:
顾玮
依托单位:
学科分类:
H1701.创伤
结题年份:
2016
批准年份:
2012
项目状态:
已结题
项目参与者:
顾玮、胡义杰、段朝霞、曾灵、王海燕、杜娟、张安强
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中文摘要
miRNA是基因转录后水平调节的重要分子,与炎症、免疫反应密切相关。前期研究通过多中心临床实验,系统筛选与严重创伤并发症相关的miRNA基因多态性,发现miR-608 rs4919510C/G在多个人群中与脓毒症、多器官功能衰竭发病率密切相关,且能提高细胞内成熟miR-608表达水平,提示其可能为一个功能性SNP位点。为深入研究该位点的功能意义,本课题拟从其影响miR-608成熟和miR-608与靶基因相互作用两方面,利用定量PCR、磁珠筛选和表达谱芯片等系列体外实验,阐明其影响miR-608成熟的具体机制,明确miR-608在THP-1/U937细胞中的靶基因,证实rs4919510在其中的作用;进一步利用不同基因型的严重创伤患者标本进行在体验证。研究旨在从功能水平上明确miR-608 rs4919510影响严重创伤患者预后的机制,为严重创伤并发症的预警诊断提供新的分子标志。
英文摘要
miRNAs are post-transcriptional regulators that bind to complementary sequences on target messenger RNA transcripts (mRNAs), usually resulting in translational repression or target degradation and gene silencing. They have been demonstrated to play important role in inflammation and immune response. Our previous studies have found out that miR-608 rs4919510 C/G has close relationship with the morbidity of complications, such as sepsis and multiple organ failure, in severe trauma patients through multi-center clinical trials. rs4919510G has also been found to be associated with higher levels of mature miR-608, suggesting that it maybe a functional single nucleotide polymorphism. In order to further clarify the functional significance of rs4919510, we attempted to found out the effect of rs4919510 on the mature processor of miR-608 and miR-608's interaction with its target genes, using quantitative PCR, magnetic bead screening, expression microarray and other in vitro experiments. We also wanted to clarify miR-608's target genes in THP-1 or U937 cells. Furthermore, we reconfirm our results using samples from trauma patients with different genotypes. This study was designed to demonstrate the functional significance of miR-608 rs4919510 and clarify the mechanism of its impact on the outcome of the severe trauma patients. It will provide a new molecular marker for the early warning of complications of severe trauma patients.
MiR-608是近年来新发现的miRNA。我们及其他研究提示其在脓毒症、肿瘤等多种炎症相关疾病的发病机制中发挥重要作用。miR-608 rs4919510C/G位点被发现与脓毒症、多器官功能衰竭发病率密切相关,可能为功能性多态性位点。为明确miR-608及其多态性位点的功能意义,我们首先利用多中心大样本,进一步验证了miR-608 rs4919510位点与创伤并发症发生率之间的相关性,发现在重庆(n=666),云南(n=286)及浙江(n=316)人群中rs4919510分别与脓毒症的发病率和/或MODS评分升高相关,且在重庆(P=0.034)、浙江(P=0.012)和合并人群中(P=1.13×10-5)差异显著。生物信息学分析显示rs4919510变异可引起其发夹结构自由能升高(-30.30kcal/mol vs. -31.10kcal/mol)和碱基配对结构的改变。体外转染实验也证实突变型质粒转染后细胞内成熟miR-608的表达水平显著高于野生型质粒(P=0.002)。为进一步明确miR-608在单核细胞中的靶基因,我们通过慢病毒转染技术,建立了miR-608低表达THP-1细胞系。通过表达谱芯片检测方法筛选出miR-608在THP-1细胞中可能的靶基因。运用qPCR、Westernblot等体外实验,我们证实干扰细胞内成熟miR-608水平可以显著影响ELANE基因的mRNA和蛋白表达水平,提示ELANE基因可能为miR-608在单核细胞中的靶基因。生物信息学分析提示miR-608与ELANE基因结合的位点很可能在其外显子区域内。该结果通过报告基因实验进一步证实。研究结果提示miR-608是ELANE基因在单核细胞中表达的重要调节分子。miR-608及其靶基因ELANE很可能成为脓毒症新的生物标志物或治疗靶点。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:10.1097/sla.0000000000000687
发表时间:2015
期刊:Annals of Surgery
影响因子:9
作者:Anqiang Zhang;W. Gu;L. Zeng;lianyang zhang;D. Du;Mao Zhang;J. Hao;Cai-li Yue;Jian-xin Jiang
通讯作者:Anqiang Zhang;W. Gu;L. Zeng;lianyang zhang;D. Du;Mao Zhang;J. Hao;Cai-li Yue;Jian-xin Jiang
Identification of haplotype tag single nucleotide polymorphisms within the nuclear factor-κB family genes and their clinical relevance in patients with major trauma.
核因子-κB家族基因内单倍型标签单核苷酸多态性的鉴定及其与重大创伤患者的临床相关性
DOI:10.1186/s13054-015-0836-6
发表时间:2015-03-20
期刊:Critical care (London, England)
影响因子:--
作者:Pan W;Zhang AQ;Gu W;Gao JW;Du DY;Zhang LY;Zeng L;Du J;Wang HY;Jiang JX
通讯作者:Jiang JX
Neutrophil CD64 expression as a diagnostic marker for sepsis in adult patients: a meta-analysis
中性粒细胞 CD64 表达作为成年患者脓毒症的诊断标志物:荟萃分析
DOI:10.1186/s13054-015-0972-z
发表时间:2015-06-10
期刊:CRITICAL CARE
影响因子:15.1
作者:Wang, Xiao;Li, Zhong-Yun;Jiang, Jian-Xin
通讯作者:Jiang, Jian-Xin
SOCS家族基因多态性影响创伤患者预后的分子机制研究
- 批准号:81471861
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:80.0万元
- 批准年份:2014
- 负责人:顾玮
- 依托单位:
LBP基因标签SNP的筛选及其与脓毒症易患性的关联研究
- 批准号:30901416
- 项目类别:青年科学基金项目
- 资助金额:24.0万元
- 批准年份:2009
- 负责人:顾玮
- 依托单位:
国内基金
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