靶向c-Myb小分子活性筛选及调控老年性造血干细胞红系分化障碍的作用研究

老年性贫血是一种发病率较高，预后较差的老年常见疾病。衰老影响红系分化，多个转录因子参与调控红系特异基因表达，其中红系终末分化过程精确依赖c-Myb表达水平。c-Myb是重要的核转录因子之一，可以调控造血干/祖细胞的增殖、存在和分化。我们应用反向药理学原理，利用计算机辅助药物设计和快速逆流色谱分离等手段获得了近百种小分子合物，并进一步利用体内外模型进行活性筛选和功能研究。1首先运用双荧光素酶报告基因检测系统进行靶向c-Myb的化学小分子的筛选, 初步获得35种靶向抑制剂和6种靶向激活剂。2然后以斑马鱼作为模式动物，发现多种c-Myb抑制剂或激活剂对斑马鱼红系、髓系和淋巴细胞发育具有明显的调控作用。3然后，再用集落形成分析实验检测效果明显的小分子对小鼠骨髓造血干/祖细胞，各谱系祖细胞克隆形成的影响，已获得1种调控作用明显的抑制剂和1种激活剂。4最后，用EMSA检测化学小分子靶向c-Myb的特异性。在实验中，我们发现化学小分子不仅影响红系的分化，部分化学小分子特异性影响髓系的分化和/或淋巴细胞的分化。5同时，我们以斑马鱼早期发育胚胎为模型，通过kzp MO和DNA显微注射技术，从正反两方面探讨新基因kzp过表达和不表达对斑马鱼原生造血和血管生成的影响，并应用chip和rescue实验进一步探讨kzp参与斑马鱼原生造血调控的机制，推测发现kzp可能通过gata2调控红系原生造血，通过pu.1 调控髓系原生造血。我们的研究给治疗老年性贫血提供了新的依据，并对其他血液性疾病治疗具有重要的意义。