DNA甲基化参与非小细胞肺癌细胞(A549/DDP)顺铂耐药的研究
结题报告
批准号:
81101650
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
22.0 万元
负责人:
张有为
依托单位:
学科分类:
H1821.肿瘤治疗抵抗
结题年份:
2014
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
汪竹、韩芳、王艳芬、朱卉、王耀霞
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中文摘要
DNA甲基化通过调控药物代谢通路中关键基因的表达,参与肿瘤细胞对化疗药物的耐受机制。我们前期通过体外实验证实去甲基化药物5-aza-dC联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA显著逆转NSCLC顺铂耐药株A549/DDP耐药表型,并可能与错配修复基因hMLH1去甲基化有关。本项目拟进一步研究二者联合对A549/DDP细胞体内种植瘤化疗敏感性的影响,并通过甲基化芯片筛选A549/DDP与亲本细胞A549的差异性甲基化位点,结合生物信息学分析可能参与顺铂耐药的关键基因,在各组药物处理的A549/DDP细胞株和种植瘤中进一步验证。继而通过新鲜NSCLC组织体外药敏试验,以及回顾性分析含顺铂方案化疗的初治NSCLC患者资料(ORR、PFS、OS),明确上述关键基因的甲基化与顺铂化疗敏感性的关系。可望阐明表观遗传修饰剂在逆转NSCLC细胞顺铂耐药表型中的作用及其机制,并筛选一组顺铂化疗敏感性预测的甲基化谱。
英文摘要
本课题研究目的在于明确DNA甲基化参与非小细胞肺癌(NSCLC)顺铂耐药机制,进而探索逆转耐药策略。首先通过药物持续暴露建立NSCLC顺铂耐药株(A549/DDP),通过 Agilent Human 8*60 表达谱芯片和 Illumina HumanMetylation450K甲基化芯片,筛选顺铂耐药 A549/DDP与亲本株 A549细胞的差异。在 A549/DDP中表达下调、高甲基化的共372个基因,这些基因的功能涉及细胞粘附、细胞分化、细胞增殖的负性调节信号、药物反应、GTPase 介导的信号转导、胚胎发育、缺氧反应、细胞骨架组织等大部分人体生物学过程;10个基因(S100P, GDA, WISP2, LOXL1, TIMP4, ICAM1, CLMP, HSP8, GAS1, BMP2)被挑选出来在原代肿瘤细胞与 TCGA (the Cancer Genome Atlas)标本中验证与顺铂敏感性的关系;体内外实验证实低剂量的 5-Aza-dC(1μM) 和TSA (100nM )联合, 可逆转顺铂耐药性,伴随候选基因(GAS1,TIMP4, ICAM1和WISP2)的去甲基化,表达恢复;A549/DDP过表达 GAS1直接抑制细胞增殖,诱导细胞周期组织,增强凋亡,并增加细胞对顺铂的敏感性。此外,本研究还发现,绿茶的主要有效成分茶多酚没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)可逆转NSCLC细胞的顺铂耐药性,其机制也与候选基因(GAS1,TIMP4, ICAM1和WISP2)的去甲基化、表达恢复有关系。总之,我们发现候选基因高甲基化在NSCLC顺铂耐药形成中具有重要作用,表观遗传修饰剂可能通过去甲基化作用逆转顺铂耐药性。上述研究结果已发表于Epigenetics(IF=5.108)和Biomedicine & pharmacotherapy(已接受,待刊,IF=2.108)
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DOI:10.1007/s12032-014-0141-2
发表时间:2014-10
期刊:Medical Oncology
影响因子:3.4
作者:W. Deng;Ning Li;X. Wan;S. Luo;You-Wei Zhang
通讯作者:W. Deng;Ning Li;X. Wan;S. Luo;You-Wei Zhang
DOI:10.4161/epi.28601
发表时间:2014-06-01
期刊:EPIGENETICS
影响因子:3.7
作者:Zhang, You-Wei;Zheng, Yun;Tong, Jian-Dong
通讯作者:Tong, Jian-Dong
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