基于PDZ结构域的NR2B表达调控在坐骨神经痛慢性化中的作用

坐骨神经痛是临床常见的慢性疼痛，我们前期研究发现脊髓背角内突触后膜含NR2B的NMDA受体上调在多种疼痛中起重要作用。NR2B在突触后膜的表达与其合成和转运增多以及内化减少密切相关，NR2B到树突末端的转运依赖于驱动蛋白KIF17；NR2B的内化与其ESDV模序和突触后密度蛋白PSD95结合有关，可磷酸化NR2B内化模序YEKL Y1472位点，抑制其内化。本研究采用激酶抑制剂、构建小肽等方法，通过行为学、Western-blot等技术，调控NR2B与PDZ结构域在慢性疼痛中的作用。结果提示：①鞘内注射大麻素受体2激动剂JWH015可以显著改善稳定期的骨癌痛，呈剂量依赖性，预先给予拮抗剂AM630后JWH015的抗痛敏作用降低；NR2B的mRNA与痛行为学变化一致。②CCD大鼠第7天鞘内注射Cdk5抑制剂Roscovitine，可缓解坐骨神经痛，脊髓NR2A mRNA与疼痛行为学一致，而NR2B无明显差异。③腹腔注射GSK-3β的抑制剂Licl或鞘内注射右旋美托咪定可抑制NR2B磷酸化，分别减轻坐骨神经痛行为和瑞芬痛觉过敏。④鞘内给予棕榈酰化抑制剂2-BP均能够缓解CCD大鼠痛敏，并降低脊髓NR2B棕榈酰化。⑤骨癌痛小鼠5-14天脊髓KIF17、mLin10、CaMKⅡ、NR2B表达升高，重复鞘内注射NR2B拮抗剂艾芬地尔可缓解痛敏，并降低蛋白；Myr-RC-13可破坏KIF17与mLIN相互作用，鞘内注射后可降低脊髓KIF17和NR2B表达，缓解骨癌痛；CaMKⅡ拮抗剂KN93鞘内注射可提高痛阈，降低KIF17和NR2B，提示CaMKⅡ参与调控KIF17/NR2B的转运或表达。⑥在小鼠骨癌痛的形成及维持过程中，脊髓水平NR2B、PSD95表达增加；鞘内注射小肽Myr-NR2B9c，选择性抑制NR2B与PSD95间相互作用后，骨癌痛缓解，同时脊髓NR2B、PSD95表达降低。⑦鞘内给予CaMKⅡ抑制剂m-AIP后能缓解CCI大鼠的疼痛和被动回避行为障碍，降低海马CaMKⅡ、NR2B表达；脊髓和前扣带回水平的CaMKⅡ-CREB信号通路还参与CCI大鼠疼痛情绪，鞘内注射KN93及m-AIP，可改善CCI大鼠痛觉辨识及疼痛相关负性情绪。该课题为以PDZ结构域为靶点，揭示NR2B磷酸化、棕榈酰化等修饰及其转运、内化等在疼痛中的机制，为慢性疼痛治疗提供理论依据。