外源基因在衣藻叶绿体中高效表达机制的研究

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基本信息

  • 批准号:
    30900126
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
  • 资助金额:
    19.0万
  • 负责人:
  • 依托单位:
  • 学科分类:
    C0208.植物资源保护与利用
  • 结题年份:
    2012
  • 批准年份:
    2009
  • 项目状态:
    已结题
  • 起止时间:
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

随着植物叶绿体生物反应器特别是衣藻叶绿体生物反应器的发展,已在表达载体构建技术、载体转化技术、目的蛋白检测技术等方面取得长足进展。但外源基因表达量低下一直是困扰衣藻叶绿体生物反应器商业化的一个瓶颈。衣藻叶绿体基因组测序的完成使解决上述问题成为可能。本课题拟首先克隆衣藻内源性强启动子,在对启动子序列分析的基础上,阐明衣藻叶绿体基因表达调控规律,同时利用序列突变技术构建强启动子。其次综合利用强启动子、增强子、5'编码区、密码子的偏好性等各种调控元件和调控措施来增加外源基因的表达量,从而为衣藻叶绿体生物反应器的商业化应用奠定坚实的基础。.在上述工作的基础上,本研究还拟实现乙肝病毒S基因在衣藻叶绿体中的高效表达,以便检验综合表达调控规律是否具有普遍性,同时也为利用衣藻叶绿体生物反应器生产乙肝疫苗打下基础。

结项摘要

在本研究中,首先克隆了衣藻内源性启动子、增强子、终止子及5’与3’非翻译区等调控序列,在此基础上,构建了含有外源目的基因,衣藻叶绿体同源重组序列及不同调控元件组合的系列衣藻叶绿体表达载体,基因枪法转化衣藻细胞后,经壮观霉素抗性筛选,获得了阳性转化子。分子生物学检测结果表明,利用同源重组策略可将外源目的基因整合到衣藻叶绿体基因组中。转化含有5’及3’chlL同源片段,atpA启动子,(dAAAGGG)8增强子元件及rbcL终止子的调控元件组合能够高效调控乙肝病毒S基因的表达,表达量在所有转化子中是最高的,可占衣藻可溶性总蛋白的2.9%左右。表达的目的蛋白能够引起动物的免疫反应,表明了利用衣藻叶绿体生物反应器生产疫苗的良好前景。

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Cellulase immobilization properties and their catalytic effect on cellulose hydrolysis in ionic liquid
离子液体中纤维素酶的固定化特性及其对纤维素水解的催化作用
  • DOI:
    10.5897/ajmr11.922
  • 发表时间:
    2012-01
  • 期刊:
    African Journal of Microbiology Research
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    Zhongliang Su;Xingyu Yang;Luli;Hongbo Shao;Shitao Yu
  • 通讯作者:
    Shitao Yu
莱茵衣藻叶绿体PsbA启动子的克隆及其活性验证
  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    --
  • 期刊:
    科学技术与工程
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    张伟;苏忠亮;冯鑫
  • 通讯作者:
    冯鑫
纤维素酶活性的研究进展
  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    --
  • 期刊:
    安徽农业科学
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    苏忠亮;张伟;于世涛
  • 通讯作者:
    于世涛
聚乙二醇修饰纤维素酶的性能研究
  • DOI:
    --
  • 发表时间:
    --
  • 期刊:
    青岛科技大学学报(自然科学版)
  • 影响因子:
    --
  • 作者:
    谢娟;李露;苏忠亮;于世涛
  • 通讯作者:
    于世涛

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  • 发表时间:
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    苏忠亮
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课题项目:调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要:

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题,其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子,其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而,TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用,影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法,探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用,为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义,并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路:

科学问题:TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达?
前期研究:已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应,但其具体机制尚不明确。
研究创新点:本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线:包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术:TRIM2与病毒RNA的相互作用分析,IFN-β启动子活性检测。
实验模型:使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
      
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