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长链非编码RNA-VEC1340靶定KLF4在血管内皮细胞损伤中的调控及机制研究
结题报告
批准号:
81470550
项目类别:
面上项目
资助金额:
69.0 万元
负责人:
赵朝
依托单位:
学科分类:
H0214.动脉粥样硬化与动脉硬化
结题年份:
2018
批准年份:
2014
项目状态:
已结题
项目参与者:
纪玉强、张勇、刘小军、李霞、杨朋康、赵思嘉、寻萌
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中文摘要
研究表明长链非编码(lncRNA)在各种生物学过程及疾病中发挥重要的调节作用。lncRNA-VEC1340是我们前期筛选并初步验证在损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中异常表达的lncRNA,并通过生物信息学和文献分析预测Krüppel样因子4(KLF4)是其靶基因。本项目拟对lncRNA-VEC1340在HUVEC损伤中的作用及机制开展进一步研究:(1)通过gain-of-function和loss-of-function干预实验明确VEC1340在HUVEC损伤中的作用;(2)荧光素酶报告基因系统、RNA pull-down、竞争性结合实验验证KLF4 是其靶标;(3)Western blot、免疫共沉淀、激光共聚焦显微镜研究VEC1340对KLF4表达水平、蛋白半衰期、乙酰化及亚细胞定位的影响。通过以上研究将为VEC损伤的治疗提供新的理论基础、实验依据及治疗靶点。
英文摘要
An increasing body of evidence reveals that lncRNA plays an important role in modulating a varity of biological processes and is involved in the pathogenesis of many diseases. lncRNA-VEC1340, preliminarily selected and validated by IncRNA chip in our pre-experiment, was abnormally expressed in the injured HUVEC, and KLF4 was predicted to be the target gene by bioinformatics and literature analysis. This project was to carry out further studies on the role and mechanism of lncRNA-VEC in the injured HUVEC: (1) To define the role of lncRNA-VEC1340 in the damage of HUVEC by using the experiments of gain-of-function and loss-of-function. (2) To verify the predicted tagart KLF4 through Luciferase@ Reporter Gene System, RNA pull-down and competitive binding experiment. (3)To explore the regulation of KLF4 expression levels, half-life and acetylation of protein, sbucelluar location by lncRNA-VEC1340 through the Western blot, co-immunoprecipitation and laser scanning confocal microscope. It will provide new theoretical basis, experimental evidence and therapeutic targets through this project.
动脉粥样硬化(AS)引发的心脑血管疾病是造成死亡的主要原因之一,而 AS 是多因素、多机制协同作用的结果,目前公认血管内皮细胞(VEC)的损伤和功能障碍是AS发生和发展的始动因素和中心环节之一。研究表明长链非编码(lncRNA)在各种生物学过程及疾病中发挥重要的调节作用。但在 AS 的研究尚处初始阶段。本研究在前期研究的基础上利用芯片和定量PCR证实了lncRNA-VEC1340在ox-LDL诱导的HUVEC损伤过程中的表达水平增高,而KLF4 mRNA水平降低;lncRNA-VEC1340、KLF4基因的表达水平受ox-LDL作用浓度及作用时间影响,呈剂量依赖性和时间依赖性;利用gain-of-function和loss-of-function干预实验来研究了lncRNA-VEC1340在ox-LDL诱导的VEC损伤过程中的作用, lncRNA-VEC1340可以抑制HUVEC增殖,促进凋亡,炎症因子ICAM-1、VCAM-1、IL-6、MCP-1、MMP-2分泌增加,KLF4 mRNA及蛋白水平降低;利用双荧光素酶报告基因实验验证前期预测的KLF4是lncRNA-VEC1340的靶基因,通过RNA pull-down实验验证lncRNA-VEC1340与KLF4蛋白之间结合;通过Western blot、及定量PCR探讨了lncRNA-VEC1340对KLF4蛋白表达的调控;临床研究了lncRNA-VEC1340及LIPCAR、MALAT1、GAS5在冠心病患者中的表达。初步阐明了lncRNA-VEC1340在HUVEC损伤中的作用及其机制,为进一步了解VEC损伤机制提供了新的理论基础和实验依据,进而为AS的治疗提供了新的靶点。
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Integrated analysis of long noncoding RNA and mRNA expression profile in children with obesity by microarray analysis.
通过微阵列分析整合分析肥胖儿童的长非编码RNA和mRNA表达谱
DOI:10.1038/s41598-018-27113-w
发表时间:2018-06-08
期刊:Scientific reports
影响因子:4.6
作者:Liu Y;Ji Y;Li M;Wang M;Yi X;Yin C;Wang S;Zhang M;Zhao Z;Xiao Y
通讯作者:Xiao Y
DOI:--
发表时间:2015
期刊:陕西医学杂志
影响因子:--
作者:刘佩勇;谢梅;纪玉强;赵朝;程曼丽
通讯作者:程曼丽
Aberrant Expression of Circular RNAs in Endothelial Dysfunction
内皮功能障碍中环状 RNA 的异常表达
DOI:--
发表时间:2015
期刊:J Am Coll Cardiol
影响因子:--
作者:Yuqiang Ji;Manli Cheng
通讯作者:Manli Cheng
DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2015.30.004
发表时间:2015
期刊:现代生物医学进展
影响因子:--
作者:张铭;纪玉强;谢梅;王楠;赵朝
通讯作者:赵朝
Prognostic significance and dynamic change of plasma macrophage migration inhibitory factor in patients with acute ST-elevation myocardial infarction.
急性ST段抬高型心肌梗死患者血浆巨噬细胞迁移抑制因子的预后意义及动态变化
DOI:10.1097/md.0000000000012991
发表时间:2018-10
期刊:Medicine
影响因子:1.6
作者:Deng F;Zhao Q;Deng Y;Wu Y;Zhou D;Liu W;Yuan Z;Zhou J
通讯作者:Zhou J
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