OCILRP2在T细胞活化中的协同刺激作用及其机制

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
30972687
项目类别：
面上项目
资助金额：
33.0万
负责人：
马远方
依托单位：
河南大学
学科分类：
C0801.固有免疫
结题年份：
2012
批准年份：
2009
项目状态：
已结题
起止时间：
2010-01-01 至2012-12-31

项目参与者：
田文志；白慧玲；柴立辉；王明丽；蒋祺；杜丽彬；季泽俊；秦方圆；
关键词：
共刺激分子 T淋巴细胞 NKRP1f OCILRP2 信号转导

项目摘要

我们在前期研究中发现了一对可辅助T细胞活化的分子OCILRP2及NKRP1f。OCILRP2高表达于B细胞及DC，在静止T细胞中低表达，但T细胞活化后其表达水平可迅速增高。我们研究证实，NKRP1f/OCILRP1f可增强CD3和CD28介导的T细胞增殖及IL-2产生，而可溶性OCILRP2-Ig则起抑制作用。结果表明，OCILRP2可能是一种新的共刺激分子，NKRP1f作为OCILRP2的配体而发挥作用；NKRP1f与OCILRP2结合可进一步增强CD28介导的CD4+T细胞的活化；OCILRP2不能取代CD28，但与CD28行使协同作用；OCILRP2信号可促进已活化细胞进入细胞周期。本研究拟进一步开展：①制备OCILRP2特异性抗体；②体内验证OCILRP2在T细胞活化中的协同刺激作用；③鉴定与OCILRP2协同作用的蛋白；④研究OCILRP2在T细胞活化过程中信号转导的分子机制。

结项摘要

破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2 (Osteoclast Inhibitory Lectin Related Protein 2，OCILRP2）为II型跨膜蛋白，选择性表达于B淋巴细胞、DC细胞和活化的T细胞中，是一个新的T细胞活化共刺激分子。然而，OCILRP2共刺激T细胞活化的机制仍不明确。由于OCILRP2胞内区较短不足以传递信号，我们推测OCILRP2可能通过与包含ITAM结构域的DAP12蛋白结合激活相关的下游信号通路，如MAPK通路。为此，本项目基因工程、激光共聚焦、基因沉默、骨髓移植、流式细胞术、ELISA、免疫印迹、免疫共沉淀和EMSA等技术，通过体内体外及细胞水平和分子水平方面的一系列研究取得以下研究结果：①制备了具有生物活性的OCILRP2胞外段可溶性蛋白及其抗体。②建立了OCILRP2 基因沉默的骨髓移植小鼠模型，体内及体外结果显示OCILRP2 基因沉默明显抑制了由CD3/CD28刺激T细胞及ELT细胞系细胞的增殖及IL-2的分泌，而且用OCILRP2胞外段可溶性蛋白阻断获得同样的研究结果，但是PMA影响，说明OCILRP2参与T细胞活化，影响T细胞的功能。③流式细胞术分析和激光共聚焦显微镜观察发现未受抗体刺激的EL4 T细胞中OCILRP2主要表达在细胞浆，CD3/CD28抗体刺激后OCILRP2被募集到细胞膜上，而PMA刺激不能改变其胞内分布。④激光共聚焦显微镜观察发现OCILRP2/DAP12二者共定位于细胞膜上，免疫共沉淀和GST-pulldown实验结果显示OCILRP2/DAP12二者彼此存在相互作用，提示DAP12可作为OCILRP2转导信号的衔接分子参与OCILRP2信号转导促进CD3/CD28刺进引起的T细胞活化。⑤进一步对OCILRP2/DAP12结合后下游的信号传递途径研究发现，OCILRP2沉默后raf、Erk、 Jnk和Lck的磷酸化以及NF-κB活化受到抑制，但是PI3K-AKT通路却不受影响，并且OCILRP2抗体作为阻断剂能部分抑制CD3/CD28共刺激的EL4 T细胞活化以及转录因子NF-AT、AP-1和NF-κB的激活。总之，这些研究表明OCILRP2与DAP12结合通过激活Erk/JNK/NF-κB等信号通路最终导致T细胞活化，影响T细胞功能，这对研究其他缺少ITAM基序的蛋白信号传递具有参考价值。