猪流行性腹泻病毒S蛋白B细胞表位鉴定与功能研究

批准号:
31340003
项目类别:
专项基金项目
资助金额:
15.0 万元
负责人:
任晓峰
依托单位:
学科分类:
C1802.兽医病毒学
结题年份:
2014
批准年份:
2013
项目状态:
已结题
项目参与者:
方莹、曹丽艳、丛郢颖、赵高伟、窦秀静
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中文摘要
猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪流行性腹泻(PED)给养猪业造成了巨大的经济损失。PEDV的囊膜纤突(Spike, S)是主要的免疫原蛋白,可诱导中和抗体产生并提供免疫保护。目前尚无精确定位PEDV S蛋白B细胞表位的报道。本研究拟表达PEDV S蛋白,制备PEDV单克隆抗体。将纯化的抗体与表达复合外源多肽的噬菌体库进行生物淘选鉴定与该单抗能特异结合的噬菌体。通过DNA提取,PCR和基因测序鉴定PEDV S蛋白B细胞表位。通过免疫荧光实验、定量PCR和病毒中和实验等特性PEDV B细胞表位在抗PEDV感染中的作用机制。本项目将为深入研究PEDV侵染机理研究奠定基础。
英文摘要
Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) may cause porcine epidemic diarrhea, leading to severe economic loss in pig industry. The spike (S) protein of PEDV is an immunogenic antigen, which is responsible for eliciting immune response. At present, no information regarding fine mapping of B cell epitopes in the PEDV S protein is reported. In this study, we will express PEDV S protein, generate its monoclonal antibody (mAb). The purified mAb will be used as target for a biopanning with phage display random peptide library. By DNA extraction, PCR and sequencing, we will identify B cell epitopes in the PEDV S protein. In addition, the function of these epitopes will be characterized by immunofluorescence assays, quantified PCR and virus neutralizing assays. This work will be a basis for investigating invasion mechanisms of PEDV in-depth.
猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)引起的猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea, PED)给养猪业造成了巨大的经济损失。PEDV的囊膜纤突(Spike, S)是主要的免疫原蛋白,可诱导中和抗体产生并提供免疫保护。目前尚无精确定位PEDV S蛋白B细胞表位的报道。本研究成功表达PEDV S1蛋白,重组蛋白分子量大小为60 KD,免疫BALB/c小鼠采用杂交瘤技术获得1株能稳定分泌抗PEDV S1蛋白的单克隆抗体5E12。以纯化的小鼠单克隆抗体腹水为模板与表达复合外源多肽的噬菌体库进行生物淘选鉴定与该单抗能特异结合的噬菌体。通过DNA提取确定10个亲和噬菌体核苷酸序列并推导出其氨基酸序列分别为LMQINPTYYQIM(L), WSFNPSTYTIAG(W) 和 HDFVADMYQLAQ(H)。生物公司合成亲和多肽后,分别以病毒蚀斑、荧光定量PCR和免疫荧光实验对亲和多肽抑制病毒感染的效率进行了检测,结果表明L肽和W肽对PEDV的抑制率最高,而H肽的抑制效果较差。经序列比对表明“MQFNPTYYQLA”可能作为PEDV S1蛋白单克隆抗体5E12的配体模拟表位,其与PEDV S1蛋白201-212位的序列“MQYVYTPTYYML”有最高的相似性。并且与PEDV S1蛋白B细胞表位的生物信息学分析结果相符。故推断基序201MQYVYTPTYYML212 是PEDV S1 蛋白的模拟表位。本项目将为深入研究PEDV侵染机理研究奠定基础。
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span style=color:black;font-size:12pt;spanCoronavirus entry and release in polarized epithelial cells: a review/span/span
冠状病毒在极化上皮细胞中的进入和释放:综述
DOI:--
发表时间:2014
期刊:Reviews in Medical Virology
影响因子:11.1
作者:Yingying Cong;Xiaofeng Ren
通讯作者:Xiaofeng Ren
DOI:--
发表时间:2013
期刊:Monoclonal Antibodies in Immunodiagnosis and Immunotherapy
影响因子:--
作者:Zhaoheng Qin;Xuying Ge;Xiangping Yin;Cheng Xia;Ri-E Bu;Ying Fang;Jixiang Liu;Yu Gao;Xiaofeng Ren
通讯作者:Xiaofeng Ren
DOI:--
发表时间:2013
期刊:Monoclonal Antibodies in Immunodiagnosis and Immunotherapy
影响因子:--
作者:Zhaoheng Qin;Xuying Ge;Xiangping Yin;Cheng Xia;Ri-E Bu;Ying Fang;Jixiang Liu;Yu Gao;Xiaofeng Ren;
通讯作者:
DOI:--
发表时间:2014
期刊:Virology
影响因子:--
作者:Fandan Meng;Suo Siqingaowa;Dante S Zarlenga;Yingying Cong;Xiaowei Ma;Qiong Zhao;Xiaofeng Ren;
通讯作者:
span style=color:black;font-size:12pt;spanA phage-displayed peptide recognizing porcine aminopeptidase N is a potent small molecule inhibitor of PEDV entry/span/span br / span /span
识别猪氨肽酶 N 的噬菌体展示肽是 PEDV 侵入的有效小分子抑制剂
DOI:--
发表时间:2014
期刊:Virology
影响因子:3.7
作者:F;an Meng;Suo Siqingaowa;Dante S Zarlenga;Yingying Cong;Xiaowei Ma;Qiong Zhao;Xiaofeng Ren
通讯作者:Xiaofeng Ren
猪传染性胃肠炎病毒感染与细胞脂筏关系的研究
- 批准号:30972195
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:32.0万元
- 批准年份:2009
- 负责人:任晓峰
- 依托单位:
应用假病毒粒子对猪传染性胃肠炎病毒感染机理的研究
- 批准号:30700590
- 项目类别:青年科学基金项目
- 资助金额:17.0万元
- 批准年份:2007
- 负责人:任晓峰
- 依托单位:
国内基金
海外基金
