小鼠胚胎诱导型热休克蛋白70基因表达的研究

采用超数排卵、输卵管冲胚和胚胎体外培养的方法提供试验用胚胎，将发育到2细胞至囊胚前期不同阶段的小鼠胚胎施不同温度的热休克处理；用荧光定量PCR 和Western Blot检测处理后胚胎热休克蛋白70（HSP70）mRNA及表达情况；将从胚胎中提取的总RNA经PCR扩增，得到HSP70 cDNA，将其测序后作同源性分析；用反义RNA借助脂效敏抑制胚胎HSP70基因表达；将经同源性分析证实的HSP70 cDNA连接到质粒载体上,再施基因转染，以增加HSP70基因表达。用上述方法检测不同发育时期和不同方法处理（增加和抑制HSP70基因表达）的小鼠胚胎HSP70的基因表达；用免疫电镜和二维凝胶电泳（2D SDS-PAGE）法分别测定HSP70基因在胚胎内的表达位点和表达量。研究成果将为进一步揭示HSP70对胚胎的作用以及明确高温环境和导致体温升高的热性疾病对动物妊娠早期胚胎生存的影响奠定理论基础。