J亚型禽白血病病毒诱导鸡CD4+T细胞特异性应答反应机制
批准号:
31802174
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
26.0 万元
负责人:
代曼曼
依托单位:
学科分类:
兽医免疫学
结题年份:
2021
批准年份:
2018
项目状态:
已结题
项目参与者:
Weisan Chen、瞿孝云、李华楠、黎世彬、廖佳钰
中文摘要
J亚型禽白血病病毒(ALV-J)在我国鸡群中普遍流行,造成的危害巨大。然而,抗ALV-J感染免疫应答机制一直都没有得到系统而深入的研究,尤其是ALV-J特异性CD4+T细胞免疫应答研究尚属空白。本项目拟在体外建立ALV-J全抗原特异性CD4+T细胞系,观察其对ALV-J单个病毒蛋白抗原应答的效应分子表达情况,阐明其在抗ALV-J感染免疫中的作用。采用步移重叠合成肽的方法,对ALV-J优势应答蛋白的优势表位进行筛选和鉴定,并在离体水平验证免疫优势应答谱。通过研究优势表位的MHC限制性,及ALV-J和表位特异性CD4+T细胞Th1和Th2类效应因子表型;揭示MHC-B单倍型SPF鸡对ALV-J抗性差异机制。本项目将明确ALV-J特异性CD4+T细胞免疫优势表位及表型,揭示ALV-J诱导鸡CD4+T细胞特异性应答反应机制,为建立有效的ALV-J防控技术和培育抗性品种提供数据和理论支持。
英文摘要
Avian Leukosis Subgroup J (ALV-J) is prevalent among various breeds of chickens in our country and causing huge harm. However, there is no thoroughly study on the mechanism of anti-ALV-J immune response. Especially, the study on ALV-J specific CD4+T cell immune response is still vacancy up to now. This project intends to establish the ALV-J antigen specific CD4+T cell line in vitro, then to observe their effector productions directing at ALV-J single antigen response, and to explore their potential effect in the anti-ALV-J infection immunity. Overlapping synthetic peptides will be used to identify the immunodominant epitopes of ALV-J immunodominant antigen. Then, the frequencies of epitope specific CD4+T cell would be verified in ex vivo. This project would elucidate the mechanism of the resistance difference among MHC-B haplotype restricted chicken lines to ALV-J, via analyzing the MHC restriction of immunodominant epitopes, and Th1 or Th2 phenotype of ALV-J and epitope specific CD4+ T cell. The research results would expound the immunodominant epitopes and phenotype of ALV-J specific CD4+ T cell response, and then uncover the mechanism of ALV-J-induced chicken CD4+T cell specific immune response. It would provide some data and theories support for making ALV-J control measures and breeding resistance varieties.
J亚型禽白血病病毒(ALV-J)在我国鸡群中普遍流行,造成的危害巨大。然而,ALV-J感染诱导适应性免疫应答研究却十分匮乏。本项目研究发现体液免疫应答产生的抗体可能并不是抵抗ALV-J感染的关键或必需要素,而鸡细胞毒性T细胞免疫应答对ALV-J感染清除发挥了重要作用。ALV-J感染SPF鸡后诱导外周血淋巴细胞中CD8+单阳性T细胞比例显著上调,CD4+单阳性T细胞和CD4+CD8+双阳性T细胞比例没有明显变化。此外,我们发现感染组鸡从21DPI开始出现了一群CD8high+T细胞,CD8+T细胞进而形成了稳定的3群细胞包括CD8high+, CD8medium+和 CD4+CD8low+T细胞群;几乎所有的CD4+CD8low+T细胞群属于CD4CD8αα表型。与此相反地是,大部分CD8high+和 CD8medium+T细胞群是CD8αβ表型。我们发现CD8high+T细胞活化可能产生效应细胞因子granzyme K, NK lysin和IFN-γ清除ALV-J感染。通过流式分选和smart-seq2单细胞测序技术比较分析ALV-J感染后CD4+CD8+T双阳性细胞与CD8+单阳性T细胞的潜在功能和基因表达谱的差异发现,CD4+CD8+ T细胞高表达调节性Treg细胞的转录因子和负调控T细胞活性的基因包括CCND1, ROCK1, FOXO1, FOXO3, TNFRSF18和TNFRSF21,因此可能发挥负调控T细胞活性的功能。与此相反地是,CD8+单阳性T细胞高表达Granzyme K、Granzyme A 和CCL5等T细胞活化应答基因。通过10xscRNAseq单细胞测序技术分析鸡外周血单个核细胞(PBMC)对ALV-J感染的应答反应,发现CD4+T细胞可能分化为细胞毒性Th1-like细胞,并对ALV-J的感染清除发挥重要作用。此外,我们通过比较ALV-J感染对不同单倍型SPF鸡(B2、B15和B19单倍型SPF鸡)致病性差异,发现B2单倍型SPF鸡对ALV-J感染具有潜在抗性,并与细胞毒性T细胞活化应答相关。最后,我们通过ELISpot试验鉴定了三条ALV-J MHC-B2限制性T细胞表位肽。以上研究结果初步揭示了ALV-J诱导T细胞免应答机理,为建立有效的ALV-J防控技术和培育抗性品种提供数据和理论支持。
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DOI:
10.1007/s00018-019-03117-1
发表时间:
2019
期刊:
Cellular and Molecular Life Sciences
影响因子:
作者:
[Dai Manman, Xu Chenggang, Chen Weisan, Liao Ming]
通讯作者:
Liao Ming
Systematic Identification of Host Immune Key Factors Influencing Viral Infection in PBL of ALV-J Infected SPF Chicken
ALV-J感染SPF鸡PBL中影响病毒感染的宿主免疫关键因素的系统鉴定
DOI:
10.3390/v12010114
发表时间:
2020-01-01
期刊:
VIRUSES-BASEL
影响因子:
4.7
作者:
[Dai, Manman, Li, Shibing, Liao, Ming]
通讯作者:
Liao, Ming
DOI:
10.3389/fcimb.2021.747094
发表时间:
2021
期刊:
Frontiers in Cellular and Infection Microbiology
影响因子:
5.7
作者:
[Dai Manman, Zhao Li, Li Ziwei, Li Xiaobo, You Bowen, Zhu Sufang, Liao Ming]
通讯作者:
Liao Ming
The Transcriptional Differences of Avian CD4(+)CD8(+) Double-Positive T Cells and CD8(+) T Cells From Peripheral Blood of ALV-J Infected Chickens Revealed by Smart-Seq2.
Smart-Seq2揭示禽类CD4 CD8双阳性T细胞和ALV-J感染鸡外周血CD8 T细胞的转录差异
DOI:
10.3389/fcimb.2021.747094
发表时间:
2021
期刊:
Frontiers in cellular and infection microbiology
影响因子:
5.7
作者:
[Dai M, Zhao L, Li Z, Li X, You B, Zhu S, Liao M]
通讯作者:
Liao M
Systematic identification of chicken type I, II and III interferon-stimulated genes
鸡I、II、III型干扰素刺激基因的系统鉴定
DOI:
10.1186/s13567-020-00793-x
发表时间:
2020-05-24
期刊:
VETERINARY RESEARCH
影响因子:
4.4
作者:
[Dai, Manman, Xie, Tingting, Feng, Min]
通讯作者:
Feng, Min
H9N2 AIV多表位重组杆状病毒构建及其对灭活疫苗免疫效力增强机理研究
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批准号:--
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项目类别:省市级项目
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资助金额:15.0万元
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批准年份:2024
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负责人:代曼曼
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依托单位:
H5N1亚型禽流感病毒感染诱导鸭T细胞效应应答研究
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批准号:--
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项目类别:省市级项目
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资助金额:10.0万元
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批准年份:2022
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负责人:代曼曼
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依托单位:
J亚型禽白血病病毒T细胞表位重组HVT活载体疫苗的构建与免疫效力测定
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批准号:32211530072
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项目类别:国际(地区)合作与交流项目
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资助金额:10万元
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批准年份:2022
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负责人:代曼曼
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依托单位:
鸡细胞毒性T细胞免疫应答在J亚型禽白血病病毒感染清除中的作用
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批准号:32172868
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项目类别:面上项目
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资助金额:58万元
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批准年份:2021
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负责人:代曼曼
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依托单位:
国内基金
海外基金