芽孢毒素BoNT-LH(N)-Elafin融合表达对气道上皮细胞黏液分泌的靶位效应

黏液高分泌是气道慢性炎症进展恶化的重要因素。各种因素所致的中性粒细胞弹力酶（NE）释放被认为是黏液过多生成的主要诱因。Elafin作为小分子肽，对NE有特异性抑制作用，并有抗炎、抗菌作用，是治疗黏液高分泌的理想靶因子。本研究将芽孢毒素中能裂解胞吐耦连蛋白从而抑制胞吐的轻链、负责毒素转位入胞的重链N端和Elafin的三者编码基因重组，得到工程酵母融合表达产物，该融合蛋白可利用Elafin N末端的锚状结构靶向耦连定位于气道上皮细胞。采用气/液相立体培养的气道上皮细胞和激光共聚集、免疫电镜技术观察融合蛋白各组份的时空分布规律和入胞效率，并考察其对黏液生成外源刺激和黏液胞吐释放两方面的抑制效应；观察比较入胞Elafin对分别保留MUC5AC启动子有效顺式元件质粒转录效率的影响，以期发现其对转录直接作用的靶点。该融合蛋白可望成为具备对外源刺激、黏液释放和生成均有抑制作用的多效候选靶点药物原型。