针刺对脑缺血损伤和保护机制相关信号蛋白磷酸化作用研究

本项目选取40只SD健康大鼠随机分为4组，即假手术组、模型组、对照点组、穴位组，10只/组，采用线栓法制备脑缺血大鼠模型，行神经功能缺损评分以及TTC染色观察大脑中动脉栓塞大鼠的梗死面积，脑组织TNF-α和Caspase-3表达的影响。同时采用抗体蛋白芯片观察针刺督脉经（穴）对缺血损伤脑组织修复过程中相关信号蛋白磷酸化的变化，找出与上述过程关系最为密切的信号分子及通路，采用免疫印迹法对该通路中关键蛋白的磷酸化水平进行检测，探讨针刺督脉经（穴）对脑组织缺血性损伤可能的修复机制。发现：①针刺大椎、百会、人中（穴）能明显改善MCAO大鼠的神经功能缺损，梗死面积缩小；穴位组TNF-α、Caspase-3阳性细胞数较模型组显著降低，差异有统计学意义（P<0.01）。②720抗体蛋白芯片检测结果显示：与假手术组比较，模型组的蛋白磷酸化水平变化大于1.5倍的蛋白中有48种出现上调，29种出现下调；与模型组比较，针刺对照点组蛋白磷酸化水平变化大于1.5倍的蛋白中有35种出现上调，24种出现下调；针刺穴位组中有28种出现上调，51种出现下调；与针刺对照点组比较，针刺穴位组中出现调整的蛋白在数量、功能种类与信号转导通路的归属上均明显优于针刺对照组。可调整涉及多个其它功能种类的蛋白，且涉及到的信号转导通路归属于细胞周期信号转导通路、MAPKS信号途径、细胞凋亡信号途径、黏附分子信号途径、非受体酪氨酸激酶信号途径、受体酪氨酸激酶信号途径等多条信号转导通路，但只有MAPKS信号传导途径中关键蛋白均被激活。③与模型组比较：针刺穴位组的p-Raf1、p-ERK含量均呈降低趋势，但无统计学差异（P>0.05）。结果提示：①针刺大椎、百会、人中（穴）对缺血损伤脑组织具有一定的保护作用。②针刺可调整造模后失调的与凋亡有关蛋白的磷酸化水平，此外，还可调整多个其它功能种类的蛋白，且涉及到的信号转导通路归属于细胞周期信号转导通路、MAPKS信号途径、细胞凋亡信号途径、黏附分子信号途径、非受体酪氨酸激酶信号途径、受体酪氨酸激酶信号途径等多条信号转导通路。MAPKS信号转导通路与针刺大椎、百会、人中（穴）对缺血损伤脑组织修复最为密切相关。③针刺能降低p-Raf1和p-ERK在缺血损伤脑组织中的表达，对缺血性脑损伤起到一定的修复作用。