七鳃鳗C1q分子特性及其协同VLR对补体激活的影响

七鳃鳗是无颌脊椎动物的代表，是现存最古老脊椎动物的活化石，是研究适应性免疫系统起源与进化的理想实验动物。其体内存在独有的适应性免疫系统- - 可变淋巴细胞受体VLR，使得该物种在进化史上具有重要的地位。在我们所构建的七鳃鳗白细胞cDNA文库中首次发现了C1q补体分子，且呈现多样性特征。分子克隆和表达L-C1qDC-1,L-C3-like及VLRB蛋白，并分别制备了多克隆和单克隆抗体。流式细胞和激光共聚焦显微镜检测发现七鳃鳗细胞能够表达L-C1qDC-1，并且L-C1qDC-1主要分布在细胞的细胞质中。免疫共沉淀和免疫印迹实验显示七鳃鳗血清中，L-C1qDC-1和VLRB之间存在相互作用。激光共聚焦显微镜也检测到当用七鳃鳗血清杀伤肿瘤细胞时，L-C1qDC-1和VLRB在肿瘤细胞中发生共定位现象，并且定位在肿瘤细胞的细胞膜上，且L-C1qDC-1和VLRB纯化后蛋白也验证了两分子相互作用。激光共聚焦实验证实七鳃鳗L-C3-like分子定位在细胞的胞浆中，Real-time PCR和Western blot分别在转录水平和蛋白水平显示各组织的蛋白表达情况。免疫共沉淀证实L-C3-like分子与VLRB存在相互作用，血清学检测及靶细胞沉积实验印证L-C3-like具有沉积在靶细胞膜表面进而协助其它分子杀伤靶细胞的功能。除此之外，我们研究了七鳃鳗细胞信号通路分子NF-KB 和IKB的相互作用及功能。本研究揭示L-C1qDC-1协同VLRB介导的适应性免疫反应，识别外来抗原，在七鳃鳗的免疫反应及免疫防御中具有重要作用。这些工作的取得为探讨七鳃鳗天然免疫与适应性免疫应答的协作与交替演化过程具有重要的理论意义。