本项目围绕构建蛋白核心识别元件和开发实时、均相荧光生物传感检测方法开展研究。成功发展了制备高活性抗体Fab片段的方法，实现了对抗体Fab片段的纳米金标记。利用纳米金猝灭的荧光标记免疫复合物，建立了动态范围可调的均相免疫荧光传感方法。制备了高活性的人雌激素受体蛋白配体结合域片段（ER-LBD），进一步建立了可均相、实时检测雌激素含量变化的受体荧光传感分析方法。合成了具有上转换性质的双光子荧光纳米粒子，初步建立了可灵敏检测雌二醇的上转换纳米生物荧光传感检测方法。项目迄今已正式发表SCI收录国际期刊论文6篇，其中4篇的影响因子在5.0以上。正式授权发明专利1项。共培养博士研究生4名，其中2名已毕业并获得博士学位。项目取得的突出性进展包括：（1）制备了高活性的抗体Fab片段，详细研究了纳米金表面的修饰与蛋白偶联方法，发现采用11-巯基十一酸(MUA)修饰纳米金可以起到稳定纳米金溶胶、减少蛋白在纳米金表面非特异性吸附的作用。同时MUA将羧基引入纳米金表面，通过与抗体蛋白表面的氨基进行共价反应，实现了对抗体的纳米金标记。对照研究了使用不同大小的纳米金颗粒对于荧光猝灭效率的影响。结果表明使用抗体Fab片段与3 nm的纳米金，可以有效减小荧光基团与猝灭基团的距离，提高荧光猝灭效率。利用纳米金猝灭的荧光标记免疫复合物，建立了动态范围可调的均相免疫荧光传感方法。方法操作简便，只需一步反应，在10 min内可得到检测结果，已成功用于检测人唾液中sIgA含量。与传统的免疫分析方法相比，本方法显著简化了操作步骤，提高了检测速度。（2）制备了高活性的双标记人雌激素受体蛋白配体结合域片段(N-His´6-ER-LBD-C-Strep tag II)。金纳米颗粒表面通过MUA修饰链霉亲和素，通过链霉亲和素与受体蛋白上所带标签Strep tag II之间的特异性结合作用，将纳米金标记到受体蛋白上。利用香豆雌酚作为荧光报告分子，与纳米金标记受体蛋白构成FRET体系，构建了可均相、实时检测雌激素含量变化的受体荧光传感分析方法。（3）合成了具有上转换性质的双光子荧光纳米粒子，激发波长800 nm，发射波长550 nm。通过用单链寡核苷酸标记小分子，再利用荧光纳米粒子标记核酸探针分子，初步实现了对雌二醇的上转换纳米生物荧光传感检测。