MC1R基因对羊驼毛囊干细胞表达毛色蛋白的影响

【目的】探索羊驼毛囊干细胞的基本生物学性质，初步阐明MC1R影响毛囊干细胞表达毛色蛋白的机理。探索MC1R质粒转染aHFSCs对毛色基因及毛色蛋白表达的影响，研究RNA干扰法以及IFN-γ、ASIP-YY对羊驼MC1R基因表达量及黑色素合成量的影响。.【方法】⑴取羊驼皮肤样本，获取毛囊干细胞，研究其基本生物学性质。⑵从羊驼皮肤组织中提取RNA，通过双酶切后连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建pcDNA3.1(+)-MC1R重组质粒，转染aHFSCs，检测毛囊干细胞中MC1R的表达。⑶合成针对羊驼黑素细胞中MC1R基因的瞬时干扰siRNA，利用脂质体RNAi-Mate将siRNA反向转染入黑素细胞，提取总RNA，检测MC1R mRNA的相对表达量；通过半定量测定MC1R蛋白的相对表达量，研究siRNA对黑素细胞MC1R基因的影响。⑷研究ASIP-YY对体外培养的黑素细胞黑色素合成的影响。⑸以小鼠成纤维细胞为模型，设计合成三对针对小鼠MEF中MC1R基因的瞬时干扰siRNA，反向转染转染MEF，检测MC1R mRNA和其蛋白的相对表达量。.【结果】⑴从形态学、细胞标志、分化能力等方面研究了羊驼毛囊干细胞的生物学性质。 ⑵构建了pcDNA3.1(+)-MC1R重组质粒。⑶证明脂质体介导的pcDNA3.1(+)-MC1R质粒转染后显著影响MC1R mRNA表达量，而对TYR和MITF mRNA影响差异不显著。⑷证明siRNA对 MC1R 基因有显著抑制作用（P<0.01），其MC1R 黑素合成量极显著低于空白对照组（P<0.01）。⑸证明ASIP-YY对体外培养的羊驼黑素细胞的增殖和黑素合成有着密切的关系。ASIP-YY对各基因mRNA的表达有显著影响。.【结论】⑴初步阐明了aHFSCs的基本生物学性质及MC1R基因在毛囊干细胞中的表达情况及对毛色蛋白的影响。⑵本试验成功克隆了高纯度的真核载体pcDNA3.1(+)-MC1R，并将其转染羊驼毛囊干细胞，初步阐明了MC1R基因在毛囊干细胞中的表达情况及对毛色蛋白的影响。⑶从体外合成的三对特异性siRNA中成功筛选出了对羊驼MC1R抑制效果确实有效的siRNA。⑷证明了不同浓度ASIP-YY黑素细胞中黑色素生成相关基因mRNA表达的影响。