鲫鱼PKR-like Zα蛋白溶液结构及其与Z-DNA结合的分子机理

在申请者前期工作的基础上，拟对鲫鱼PKR-like(CaPKR-like) Zα溶液结构及其与Z-DNA结合的分子机理进行深入分析。首先利用凝血酶切除PZα融合蛋白的His标签，过阳离子交换柱获得ZαPKR-like蛋白。同时，合成、构建含d(CG)n或r(CG)n等反向重复序列的DNA分子，用于模拟体外Z-DNA或Z-RNA。解析15N/15N,13C-标记ZαPKR-like核磁共振图谱，揭示其结构。解析15N-单标ZαPKR-like与Z-DNA结合图谱，分析与Z-DNA结合氨基酸的化学位移变化情况。点突变技术确定关键氨基酸。圆二色谱获得ZαPKR-like与Z-DNA结合的化学计量关系。表面等离子共振技术获得ZαPKR-like与Z-DNA结合常数。最终揭示鱼类Zα结合Z-DNA的分子机理，从而为了解PKR-like(PKZ)的功能及其在鱼类干扰素系统中的地位提供重要的理论依据。