草鱼Ⅰ型干扰素基因转录的分子机制
结题报告
批准号:
31060358
项目类别:
地区科学基金项目
资助金额:
23.0 万元
负责人:
胡成钰
依托单位:
学科分类:
C1907.水产生物免疫学
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
马梅生、王淑军、赵风云、谭婉珑、朱玉娇
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中文摘要
病毒病的频发已经成为制约草鱼养殖健康发展的一个突出因素。由于目前的防治方法都存在或多或少的不足,因此,对草鱼干扰素,特别是具有广谱抗病毒潜能的Ⅰ型干扰素的研究一直备受关注。为了解草鱼Ⅰ型干扰素基因转录的分子机制,本研究拟对其启动子、IRF-E和主要的干扰素调控因子IRF进行分析。首先克隆出7个启动子片断,每个片段包含1个或几个IRF-E,构建荧光素酶报告基因重组载体。同时,克隆多个草鱼干扰素调节因子(IRF)全长或功能域cDNA,并与pcDNA3.1连接。原核表达草鱼IRF的完整开放阅读框或相应的DNA结合域,凝胶阻滞分析草鱼IRF与Ⅰ型干扰素不同的启动子区域的结合。转染培养细胞以确定控制草鱼Ⅰ型干扰素基因转录的主要启动子区域和主要的草鱼IRF。该研究结果将为我们进一步了解草鱼Ⅰ型干扰素启动子不同区域、IRF-E和IRF与基因表达的关系,最终为草鱼病毒病的免疫防治提供理论依据。
英文摘要
在实验室已克隆1个草鱼Ⅰ型干扰素基因组及其启动子序列的基础上,我们对其序列特征进行了分析,发现草鱼Ⅰ型干扰素基因启动子包含启动子也包含一个典型的TATA box,4个IRF-E结合位点,两个NF-κB位点以及一个ATF-2/c-Jun结合位点。根据其启动子的结构特征,我们克隆了含有元件的CiIFN启动子片段(CiIFNP1-P9)。同时,在克隆草鱼IRF-7的基础上,通过原核表达系统获得草鱼IRF-7DBD结构域蛋白。凝胶阻滞分析得出草鱼IRF-7能够在体外与IFN各个启动子片段结合,为证明它们对IFN的调控作用提供了可靠的证据。我们还利用共转染实验技术,将CiIRF-7和IFN启动子片段分别转染至小鼠骨髓瘤细胞和草鱼肾细胞,结果表明草鱼IRF-7对Ⅰ型干扰素的正调控作用。.本研究克隆和鉴定了草鱼干扰素调节因子2(CiIRF-2)和调节因子3(CiIRF-3),并着重对实验室先前克隆的IRF-1的功能进行了分析。CiIRF-2全长cDNA 为1809 bp,其中包括35 bp的5´非翻译区(5´-UTR)、834 bp的3´非翻译区(3´-UTR)和1个编码326个氨基酸的981 bp的最大开放阅读框(ORF)。这个推测编码的CiIRF-2包含1个含有6个保守色氨酸(W)残基的保守DNA结合结构域(DBD)。CiIRF-3的全长cDNA包含1831 bp,其中含1个269 bp的3´-UTR、1个195 bp的5´-UTR及1个1377 bp的最大ORF。这个ORF推测编码458的氨基酸的蛋白质,其N-端包含一个含有5个保守色氨酸的DBD结构域,而其C-端则包含1个较保守的IRF协助结构域(IAD)。.CiIRF-1均有较低的本底表达,但当有Poly I:C或重组草鱼干扰素(rCiIFN)刺激时,CiIRF-1的表达量将迅速上调。重组CiIRF1与草鱼IFN及IRF1的启动子片段均有不同程度的结合。重组质粒pcDNA3.1-CiIRF-1与pGL3-CiIFNPs/IRF1共转染草鱼肾脏细胞(CIK)或人脐静脉内皮细胞(HUVEC),然后检测荧光信号。结果表明单独转染pGL3-CiIFNPs/IRF1的细胞荧光信号要比其与pcDNA3.1-CiIRF-1共转染的细胞荧光信号要弱挺多。CiIRF-1在草鱼IFN及IRF1的转录过程中均扮演着正调控因子的作用。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
Immunoprotection of grass carp (Ctenopharyngodon idella) with recombinant interferon (rCiIFN) against GCHV infection
重组干扰素 (rCiIFN) 对草鱼 (Ctenopharyngodon idella) 的 GCHV 感染的免疫保护作用
DOI:10.1016/j.aquaculture.2013.01.017
发表时间:2013-04
期刊:Aquaculture
影响因子:4.5
作者:Li, Dongming;Lin, Gang;Yu, Xinjian;Huang, Shenghe;Lai, Qinan;Liu, Yong;Wu, Zhiqiang;Hu, Chengyu
通讯作者:Hu, Chengyu
DOI:10.1016/j.fsi.2013.03.358
发表时间:2013-06
期刊:Fish & shellfish immunology
影响因子:4.7
作者:Q. Lai;Gang Lin;Meisheng Ma;Shenghe Huang;Wen Li;Dongming Li;Meihui Gu;Huiling Mao;Chengyu Hu-C
通讯作者:Q. Lai;Gang Lin;Meisheng Ma;Shenghe Huang;Wen Li;Dongming Li;Meihui Gu;Huiling Mao;Chengyu Hu-C
DOI:10.1016/j.gene.2012.04.091
发表时间:2012-08-01
期刊:GENE
影响因子:3.5
作者:Li, Dongming;Tan, Wanlong;Hu, Chengyu
通讯作者:Hu, Chengyu
鱼类蛋白激酶Z(PKZ)和蛋白激酶R(PKR)在响应病毒入侵时所承担的功能
  • 批准号:
    31472304
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    80.0万元
  • 批准年份:
    2014
  • 负责人:
    胡成钰
  • 依托单位:
鱼类ADAR1剪接异构体基因的鉴定及其转录调控
  • 批准号:
    31360515
  • 项目类别:
    地区科学基金项目
  • 资助金额:
    54.0万元
  • 批准年份:
    2013
  • 负责人:
    胡成钰
  • 依托单位:
鲫鱼PKR-like Zα蛋白溶液结构及其与Z-DNA结合的分子机理
  • 批准号:
    30860218
  • 项目类别:
    地区科学基金项目
  • 资助金额:
    25.0万元
  • 批准年份:
    2008
  • 负责人:
    胡成钰
  • 依托单位:
鲫鱼PKR(CaPKR-like)Za蛋白结合核酸分子的研究
  • 批准号:
    30560116
  • 项目类别:
    地区科学基金项目
  • 资助金额:
    22.0万元
  • 批准年份:
    2005
  • 负责人:
    胡成钰
  • 依托单位:
国内基金
海外基金