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杨树抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因家族成员调控杨树抗逆能力的分子机制
结题报告
批准号:
31070537
项目类别:
面上项目
资助金额:
31.0 万元
负责人:
杜希华
依托单位:
学科分类:
C1605.树木生物学
结题年份:
2013
批准年份:
2010
项目状态:
已结题
项目参与者:
郭建荣、贺继临、丁彬、马箐、于立峰、孙宏丽
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中文摘要
抗坏血酸过氧化物酶(APX,EC1.11.1.11)是以抗坏血酸(AsA)为电子供体的一种过氧化物酶,是植物体内尤其是叶绿体中清除H2O2的关键酶。本项研究首先分析杨树中APX基因的种类与组成,以及不同类型APX基因的拷贝数目、基因结构、在整个基因组中的分布等科学问题;然后从杨树中克隆各APX基因家族成员序列,利用E.coli进行原核表达,从表达产物中纯化APX蛋白,对所纯化的APX蛋白进行酶生化特性研究以及酶动力学研究;同时,分别分离杨树中各APX基因家族成员的启动子序列,分析在不同逆境胁迫下各APX基因启动子的表达调控模式。在此基础上,构建含杨树APX基因的转基因表达载体并转化杨树、烟草等植物,分析APX基因过量表达提高植物抗逆能力的机制。从而最终揭示杨树中APX基因家族成员的数量、种类及其在应对胁迫中的不同作用,并成功获得具有较高抗逆能力的转基因树木。
英文摘要
本研究的主要目的是对杨树抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因家族各成员调控杨树抗逆能力的分子机制进行研究。结果发现,杨树中存在9个APX基因(Ⅰ~Ⅸ),从741毛白杨中分别克隆得到这9个APX基因的cDNA序列。进一步分析发现,杨树APX基因Ⅳ和Ⅴ的核苷酸序列一致性高达99.2%,其理化性质也高度趋同,二者可能为等位基因。利用原核表达系统在E. coli中分别表达、纯化8种APX蛋白,并对其进行酶生化特性和酶动力学分析,结果显示各种APX酶对底物H2O2的亲和力均高于对底物抗坏血酸的亲和力,催化活性最高的两种酶是APX3和APX5;不同APX酶的最适pH和最适温度存在一定的差别。通过TAIL-PCR方法,对毛白杨APXⅡ、Ⅲ、Ⅶ和Ⅸ四个基因的启动子序列进行克隆,得到了Ⅱ、Ⅶ和Ⅸ三个APX基因启动子的部分序列,长度分别为331 bp、322 bp和299 bp。分析发现,这三个APX基因的启动子序列除了都含有启动子的基本元件,还存在一些特殊的调控元件。通过农杆菌介导法获得过量表达8个毛白杨APX基因和反义表达8个APX基因的转基因烟草,结果发现过量表达毛白杨APX基因可明显提高转基因烟草的抗干旱能力、耐盐胁迫能力和抗氧化胁迫能力,反义表达毛白杨APX基因则降低转基因烟草对干旱、盐胁迫和氧化胁迫的耐受性。进一步将APX基因的重组表达载体转入杨树,成功获得过量表达APX基因的转基因杨树,测试结果表明,过量表达APX基因可增强杨树的抗旱性,提高杨树对盐胁迫、氧化胁迫的耐受性,经筛选获得了具有较高抗逆能力的转基因杨树。本研究表明,APX基因在杨树中是以一个基因家族的形式存在,在体外生化功能方面存在一定的差异,预示其在体内的作用或分工可能不尽相同,从而以不同的表达调控模式参与杨树抗逆能力的调控。
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DOI:--
发表时间:2012
期刊:山东林业科技
影响因子:--
作者:姚叶;唐琪;李江艳;郎洪岩;杜希华
通讯作者:杜希华
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