Gli1在胃癌中的作用及其表观遗传学调控研究

本项目旨在通过对miRNA的研究从基因表达的转录后水平研究胃癌中Gli1的表达调控机制，探讨以Gli1为靶标的miRNA在胃癌发生发展过程中的作用机制。我们利用生物信息学的工具，结合文献及胃癌中异常表达的miRNA谱进行比对分析，初步筛选出miR-202-3p、miR-133b、miR-129-2-3p。结合双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和Western blot等检测方法，验证出这3条miRNA均可直接靶作用于Gli1 mRNA的3’UTR，对Gli1蛋白表达分别有不同程度的抑制，同时对Gli1的mRNA表达水平均无明显影响。然后我们采用qRT-PCR检测miRNA在胃癌组织及配对癌旁组织、胃癌细胞株中的表达水平，分析其与胃癌临床病理特征之间的关系，观察其过表达对胃癌细胞增殖、周期、凋亡、侵袭、迁移和裸鼠体内成瘤能力等生物学行为的影响。结果我们发现miR-202-3p在68%（102/150）的胃癌组织中的表达低于其在配对癌旁对照组织（P<0.05），表达水平与胃癌肿瘤大小呈负相关，miR-202-3p在胃癌细胞株MKN-28和BGC-823中表达较低，上调其在这两株细胞中的表达可抑制细胞的体外增殖和克隆形成并诱导细胞凋亡；过表达miR-202-3p能够通过促进凋亡来抑制MKN-28细胞在裸鼠皮下成瘤。miR-133b在70%（98/140）的胃癌组织中的表达低于配对癌旁组织（P<0.05），表达水平与淋巴转移分级呈负相关。miR-133b在胃癌细胞株中的表达水平明显低于在永生化胃黏膜上皮细胞GES-1，在胃癌细胞株MKN-28和SGC-7901中表达较低，在这两株细胞中上调miR-133b表达可抑制细胞的体外迁移和侵袭能力；miR-133b可抑制MKN-28细胞在裸鼠腹腔内的转移。miR-129-2-3p在80% (120/150)的胃癌组织中的表达低于其在配对癌旁对照组织（P<0.05）；miR-129-2-3p的表达水平与胃癌肿瘤的部位相关；上调miR-129-2-3p在MKN-28细胞中的表达可抑制其体外增殖和克隆形成并阻滞细胞周期，抑制其在裸鼠皮下成瘤。.部分研究结果已发表在SCI上，两篇均IF》3，培养的研究生中，一名博士顺利毕业。